本文關(guān)鍵詞： 細小病毒B VP 桿狀病毒表達系統(tǒng) 病毒樣顆粒 人細小病毒 昆蟲細胞 感受態(tài)細胞 透射電鏡 病毒感染 制備　出處：《生物工程學(xué)報》2009年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：采用昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng),制備人細小病毒B19病毒樣顆粒(VLPs)。先通過PCR方法合成細小病毒B19衣殼蛋白基因VP2,將其克隆到pFastBac1質(zhì)粒,然后轉(zhuǎn)化含桿狀病毒穿梭載體Bacmid的E.coliDH10Bac感受態(tài)細胞,獲得重組桿狀病毒表達質(zhì)粒Bacmid-VP2。在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細胞,包裝重組桿狀病毒rBac-VP2。利用rBac-VP2感染Sf9細胞表達B19VP2蛋白,通過間接免疫熒光、Western blotting等方法鑒定目的蛋白表達。采用兩次超速離心的方法對表達產(chǎn)物進行純化,純化產(chǎn)物在透射電鏡下可見直徑約22nm的VLPs。本研究成功制備了人細小病毒B19的VLPs,為B19感染血清學(xué)檢測方法的建立提供了參考。
[Abstract]:Human parvovirus B19 virus like particles were prepared by using insect baculovirus expression system. The parvovirus B19 capsid protein gene VP2was synthesized by PCR method and cloned into pFastBac1 plasmid. Then the E. coli DH10Bac cells containing baculovirus shuttle vector Bacmid were transformed to obtain the recombinant baculovirus expression plasmid Bacmid-VP2. the recombinant baculovirus expression plasmid Bacmid-VP2was transfected into Sf9 insect cells mediated by liposome, and the recombinant baculovirus rBac-VP22.The recombinant baculovirus was infected with Sf9 cells and expressed B19VP2 protein by rBac-VP2. The expression of the target protein was identified by indirect immunofluorescence and Western blotting, and the expression product was purified by two ultracentrifugation. In this study, VLPsof human parvovirus B19 were successfully prepared, which provided a reference for the establishment of a serological detection method for human parvovirus B19 infection.
【作者單位】： 山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;
【基金】：國家科技支撐計劃(No.2008BAI56B01)資助~~
【分類號】：R373

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本文編號：1551153