本文關(guān)鍵詞： 角膜內(nèi)皮細(xì)胞 MSCs 增生 細(xì)胞周期 P21 PCNA RT-PCR　出處：《暨南大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的：觀察兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞(CECs)與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)共培養(yǎng)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖力及細(xì)胞周期的變化,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)共培養(yǎng)后的角膜內(nèi)皮細(xì)胞的p21基因和PCNA基因表達(dá)進(jìn)行檢測,探討其影響機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在Transwell體系共培養(yǎng)后,倒置相差顯微鏡,HE染色觀察內(nèi)皮細(xì)胞生長及形態(tài)變化；通過流式細(xì)胞術(shù)檢測角膜內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞周期的變化；通過熒光定量PCR檢測共培養(yǎng)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞p21和PCNA基因表達(dá)情況,與對(duì)照組比較,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后探討其增殖機(jī)制。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組(CECs與BMSCs共培養(yǎng))較對(duì)照組(CECs獨(dú)立培養(yǎng))兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞G1期細(xì)胞較對(duì)照組比例下降、S期細(xì)胞比例增加,平均增加5%,增殖力顯著提高。各組共培養(yǎng)后的角膜內(nèi)皮細(xì)胞HE染色觀察見實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組明顯增多,細(xì)胞密度增高,細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,核仁及染色質(zhì)豐富,核漿比例正常。實(shí)驗(yàn)組角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)基本規(guī)則,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測顯示：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測角膜內(nèi)皮細(xì)胞p21基因和PCNA基因表達(dá)存在組間差別,經(jīng)獨(dú)立樣本分析兩樣本均數(shù)的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：(1)體外共培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與角膜內(nèi)皮細(xì)胞能在一定程度上促進(jìn)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增生,細(xì)胞形態(tài)、生物學(xué)行為無明顯異常改變。(2)共培養(yǎng)后對(duì)增殖影響的可能機(jī)制與p21基因的表達(dá)下調(diào)和PCNA基因的表達(dá)上調(diào)有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to observe the changes of corneal endothelial cell proliferation and cell cycle after co-culture of rabbit corneal endothelial cells (CECs) and bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). The expression of p21 gene and PCNA gene in co-cultured corneal endothelial cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Methods: cultured rabbit corneal endothelial cells and bone marrow mesenchymal stem cells were co-cultured in Transwell system. Flow cytometry was used to detect the changes of corneal endothelial cell cycle, and the expression of p21 and PCNA genes in co-cultured corneal endothelial cells was detected by fluorescence quantitative PCR. Compared with the control group, the proliferative mechanism of p21 and PCNA was studied statistically. Results: compared with the control group, the ratio of G _ 1 phase cells of rabbit corneal endothelial cells in G _ 1 phase was significantly lower than that of control group. The number of corneal endothelial cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group, cell density was increased, cell morphology was regular, nucleolus and chromatin were abundant, and the number of cells in the experimental group was higher than that in the control group. The morphology of corneal endothelial cells in the experimental group was normal and the expression of p21 gene and PCNA gene in the corneal endothelial cells were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The comparison of the mean number of two samples by independent sample analysis has statistical significance. Conclusion in vitro co-culture of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells and corneal endothelial cells can promote the proliferation and morphology of rabbit corneal endothelial cells. The possible mechanism of the effect of co-culture on proliferation was related to the down-regulation of p21 gene expression and the up-regulation of PCNA gene expression.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

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3 趙t，

本文編號(hào)：1522370