本文關(guān)鍵詞： 淋病奈瑟菌 孔蛋白B 大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位 核酸疫苗 蛋白疫苗 聯(lián)合免疫 免疫活性　出處：《南華大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的： 將LTB-PorB核酸疫苗和重組蛋白疫苗鼻飼免疫BALB/c小鼠,分別分析其免疫活性,探討粘膜佐劑LTB能否輔佐PorB誘導(dǎo)更有效的特異性粘膜免疫,為經(jīng)粘膜途徑感染病原體的疫苗研制進行有益探索；采用LTB-PorB核酸疫苗與重組蛋白疫苗聯(lián)合(核酸初免-蛋白加強免疫)鼻飼免疫雌性BALB/c小鼠,探討其能否增強特異性體液免疫和細胞免疫應(yīng)答水平,為研制高效抗淋病疫苗提供實驗依據(jù)。 方法： 1.對本課題組保存的真核表達重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)/porB和pcDNA3.1(-)/ltB-porB進行鑒定后,大量制備并純化；鼻飼免疫雌性BALB/c小鼠,檢測體液免疫和細胞免疫水平。 2.將本課題組保存的原核表達重組質(zhì)粒pET-30a/ltB、pET-30a/porB和pET-30a/ltB-porB在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達重組蛋白；鼻飼途徑免疫雌性BALB/c小鼠,檢測體液免疫和細胞免疫水平。 3.大量制備LTB-PorB核酸疫苗及重組蛋白疫苗；通過鼻飼途徑將核酸疫苗和重組蛋白疫苗采用核酸初免-蛋白加強(DNA prime-protein boost)聯(lián)合免疫雌性BALB/c小鼠,檢測體液免疫和細胞免疫應(yīng)答水平。 結(jié)果： 1. LTB-PorB核酸疫苗(pcDNA3.1(-)/ltB-porB)免疫組小鼠生殖道黏膜產(chǎn)生的PorB特異性sIgA和血清IgG水平隨免疫時間呈上升趨勢,第8 w sIgA A450值達0.4705±0.088,明顯高于對照組(P0.01),效價達1：320；第8 w IgG A450值為0.528±0.106,明顯高于pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS對照組(P0.01),效價達1：1280,但與pcDNA3.1(-)/porB對照組(A450：0.511±0.094)無顯著性差異(P0.05)。pcDNA3.1(-)/ltB-porB組脾淋巴細胞刺激指數(shù)和脾淋巴細胞誘生的IFN-γ、IL-4水平均明顯高于pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS對照組(P0.05)。 2. LTB-PorB重組蛋白疫苗免疫組小鼠生殖道黏膜產(chǎn)生的PorB特異性sIgA水平隨免疫時間呈上升趨勢,第6 w A450值達0.663±0.095,明顯高于對照組(P0.01),效價達1：1280；血清中PorB特異性IgG水平在第4 w達最高,A450值為0.598±0.062,明顯高于LTB和蛋白溶解液(Solution Buffer)對照組(P0.01),效價達1：5120,但與PorB對照組(A450：0.570±0.060)無顯著性差異(P0.05)。LTB-PorB組脾淋巴細胞誘生的IL-4水平和脾淋巴細胞刺激指數(shù)明顯高于LTB和Solution Buffer對照組(P0.05),但脾淋巴細胞誘生的IFN-γ水平與對照組無顯著性差異(P0.05)。 3. LTB-PorB核酸疫苗和重組蛋白疫苗聯(lián)合免疫組免疫后第8 w,小鼠生殖道sIgA(A450：1.083±0.179,效價達1：2560)、血清IgG(A450：1.023±0.116,效價達1：20480)、脾淋巴細胞誘生的IL-4(357.58±34.44pg/ml)和IFN-γ(261.85±29.92pg/ml)水平均明顯高于對照組(P0.01),小鼠脾淋巴細胞刺激指數(shù)(SI：2.12±0.29)較對照組顯著增高(P0.05)；核酸疫苗組、蛋白疫苗組和聯(lián)合免疫組血清IgG亞類IgG2a/IgGl比值分別為1.678、0.455和0.693。 結(jié)論： 1. LTB-PorB核酸疫苗和重組蛋白疫苗通過鼻飼免疫雌性BALB/c小鼠,能誘生較高水平的特異性細胞免疫和體液免疫,尤其是粘膜免疫,表明粘膜佐劑LTB可有效提高PorB誘導(dǎo)的特異性粘膜免疫應(yīng)答水平。 2. LTB-PorB核酸疫苗和重組蛋白疫苗聯(lián)合免疫誘導(dǎo)的特異性細胞免疫和體液免疫應(yīng)答水平明顯優(yōu)于單獨的核酸疫苗或重組蛋白疫苗,聯(lián)合免疫以誘導(dǎo)Th2傾向性體液免疫應(yīng)答為主。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：1501772