本文關(guān)鍵詞： 去細(xì)胞光氧化 牛頸靜脈(BJV) 鼠抗人CD34抗體 FITC標(biāo)記羊抗鼠IgG SANPAH 牛頸靜脈(BJVC) CD34抗體 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC CRL-2480) 內(nèi)皮化 體外 牛頸靜脈(BJVC) CD34抗體 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC CRL-2480) 內(nèi)　出處：《中南大學(xué)》2008年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 第一章牛頸靜脈基質(zhì)材料的制備及表面CD34抗體修飾的研究 目的:通過按不同摩爾比,用光化學(xué)交聯(lián)劑SANPAH將不同濃度鼠抗人CD34抗體接枝于經(jīng)過去細(xì)胞和光氧化后的牛頸靜脈(BJV)表面的初步研究,明確接枝鼠抗人CD34抗體的最佳濃度和與SANPAH的最佳反應(yīng)摩爾比,探討CD34抗體光化學(xué)偶聯(lián)法修飾去細(xì)胞光氧化牛頸靜脈基質(zhì)的方法。 方法:按4個不同摩爾比,SANPAH和4個不同濃度鼠抗人CD34抗體進(jìn)行反應(yīng)后,經(jīng)紫外線照射光化學(xué)接枝于經(jīng)過去細(xì)胞和光氧化后的BJV上,各組進(jìn)行快速冰凍切片,滴加FITC標(biāo)記的羊抗鼠IgG,然后在熒光顯微鏡下照相,用Image-pro plus 5.0對圖像進(jìn)行分析,比較不同摩爾比和濃度反應(yīng)、結(jié)合的熒光效果,從而初步推斷出最佳反應(yīng)和結(jié)合的摩爾比和濃度。 結(jié)果:隨著鼠抗人CD34抗體濃度的升高,熒光累積光密度、平均光密度,整體上是越來越強(qiáng),但是當(dāng)濃度高于0.665×10~(-2)mM時,熒光差別不是很明顯;當(dāng)鼠抗人CD34抗體和SANPAH的反應(yīng)摩爾比為1:20時,熒光最強(qiáng)。 結(jié)論:最佳的鼠抗人CD34抗體和SANPAH反映接枝的濃度是0.665×10~(-2)mM,最佳的摩爾比是1:20。 第二章CD34抗體表面修飾去細(xì)胞光氧化牛頸靜脈體外再內(nèi)皮化研究 目的:探討鼠抗人CD34抗體表面修飾后的去細(xì)胞光氧化牛頸靜脈體外促進(jìn)再內(nèi)皮化的情況。 方法:牛頸靜脈經(jīng)過去細(xì)胞和光氧化交聯(lián)后,裁成與24孔培養(yǎng)板孔徑相同大小的、直徑1.6cm的血管片,用光化學(xué)偶聯(lián)劑SANPAH采用第一章的方法將CD34抗體接枝到牛頸靜脈血管片上,以未接枝CD34抗體的作為空白對照。在其上面種植人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC,CRL-2480)5×10~5/ml,靜態(tài)培養(yǎng),取第1,3,5,7日標(biāo)本,一半血管片表面細(xì)胞消化并記數(shù),另一半標(biāo)本切片HE染色,對比CD34抗體接枝后和空白對照組血管片表面細(xì)胞粘附數(shù)目和HE的染色結(jié)果,以探討接枝CD34抗體體外能否促進(jìn)細(xì)胞粘附和生長。 結(jié)果:(1)細(xì)胞計數(shù):細(xì)胞培養(yǎng)第1、3、5、7日,CD34抗體組細(xì)胞數(shù)目均多于對照組(p＜0.05),(2)標(biāo)本石蠟包埋后切片HE染色結(jié)果:第1天各組血管片表面細(xì)胞排列密集,紊亂,未完全鋪開;第3天,對照組血管表面細(xì)胞數(shù)量減少明顯,有斷裂出現(xiàn);CD34抗體組細(xì)胞連接成片,呈單層排布;第5,7日這種現(xiàn)象更明顯,第7日兩組細(xì)胞數(shù)與本組第5日無明顯差異。 結(jié)論:CD34抗體表面修飾的牛頸靜脈,體外能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的粘附與生長。 第三章CD34抗體表面修飾去細(xì)胞光氧化牛頸靜脈體內(nèi)再內(nèi)皮化研究 目的:探討鼠抗人CD34抗體表面修飾后的去細(xì)胞光氧化牛頸靜脈體內(nèi)促進(jìn)再內(nèi)皮化的情況。 方法:24只犬隨機(jī)分入處理組和對照組,將CD34抗體表面修飾和未修飾的血管植入犬右室流出道與肺動脈主干之間,采用連續(xù)縫合的方式進(jìn)行旁路重建,術(shù)后兩組均給予阿托伐他汀10mg/kg%q天和1.25mg/天劑量的華法林喂養(yǎng),分別于術(shù)后10天、20天、1月、2月取出血管,標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋HE染色、Ⅷ因子免疫組織化學(xué)、透射電鏡和掃描電鏡檢測,取普通顯微鏡40倍下的HE染色的血管片標(biāo)本照相,用Image-pro plus 5.0對圖像進(jìn)行測量內(nèi)膜厚度,計算平均值,兩組間進(jìn)行比較;取普通顯微鏡40倍Ⅷ因子免疫組織化學(xué)血管標(biāo)本照相,Image-pro plus 5.0對圖像進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),評價內(nèi)皮化程度。 結(jié)果:(1)組織大體觀結(jié)果:間植血管質(zhì)軟,周圍粘連較輕,顏色變白,亞甲蘭的藍(lán)色已完全消失。剖開見血管表面光滑,瓣膜組織菲薄,開閉好,無血栓,其上附著一薄層增厚組織,薄而透明,為新生內(nèi)膜組織。 (2)HE染色結(jié)果:經(jīng)過去細(xì)胞光氧化交聯(lián)的BJVC植入體內(nèi),細(xì)胞浸潤受到抑制,浸潤全層首先在血管吻合區(qū)域發(fā)生,術(shù)后10天兩組中間區(qū)域均未能浸潤全層,只是在小部分個別區(qū)域全層BJVC有細(xì)胞相連;CD34抗體組在新生內(nèi)膜中有更多的細(xì)胞,而對照組則主要還是纖維素等不定型成分。新生內(nèi)膜在吻合區(qū)域薄,中間較厚,剔除新生內(nèi)膜后的HE切片顯示:術(shù)后10天,CD34抗體組BJVC表面有細(xì)胞粘附,對照組幾乎沒有細(xì)胞;CD34抗體組術(shù)后20天即能在內(nèi)膜面看到內(nèi)皮樣細(xì)胞覆蓋,術(shù)后1個月完整覆蓋補(bǔ)片,對照組則需要術(shù)后2個月才能看到內(nèi)膜面較多的細(xì)胞覆蓋,Image-pro plus 5.0細(xì)胞計數(shù)抗體組較對照組多,內(nèi)皮化程度高,統(tǒng)計學(xué)有顯著差異。 (3)Ⅷ因子染色結(jié)果:CD34抗體表面修飾后的血管片植入大鼠體內(nèi)10天后Ⅷ因子染色即呈陽性,而且新生內(nèi)膜中已經(jīng)形成新生微血管,20天后陽性更強(qiáng);對照組20天后內(nèi)膜面只有很少的細(xì)胞,Ⅷ因子染色是陰性,2個月后雖然內(nèi)膜面雖有較多的細(xì)胞,但是Ⅷ因子染色仍是陰性。 (4)掃描電鏡結(jié)果:CD34抗體組術(shù)后10天內(nèi)膜面可見較多的上皮樣細(xì)胞順血流方向排列,但是細(xì)胞之間有間距,術(shù)后20天內(nèi)膜面附著一層排列致密、整齊的內(nèi)皮細(xì)胞,細(xì)胞間可見形成的牢固連接;對照組術(shù)后20天內(nèi)膜面仍是增厚的纖維素樣物質(zhì),下面似有細(xì)胞突起,可能為平滑肌或成纖維細(xì)胞,表面無內(nèi)皮樣細(xì)胞覆蓋,只是粘附一些大分子物質(zhì)和散在的一些小細(xì)胞。 (5)內(nèi)膜厚度的比較:術(shù)后第10天,CD34抗體組新生內(nèi)膜較對照組厚,但是沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),隨后的20天、1個月、2個月CD34抗體組新生內(nèi)膜均較對照組薄,而且有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。兩組新生內(nèi)膜總體上說隨著時間的延長,厚度越來越大,術(shù)后20天時達(dá)到高峰,1個月即開始下降,CD34抗體組術(shù)后20天新生內(nèi)膜厚度有波折,其在2個月時下降到術(shù)后10天的水平,而對照組厚度值仍然較大。 結(jié)論:CD34抗體表面修飾的牛頸靜脈,體內(nèi)能快速達(dá)到內(nèi)皮化的效果,雖然仍然伴有內(nèi)膜的增生,但是新生內(nèi)膜的厚度顯著薄于未經(jīng)CD34抗體修飾的牛頸靜脈。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1485688