本文關(guān)鍵詞： 臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞 分離 培養(yǎng) 臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞 鑒定 誘導(dǎo)分化　出處：《中南大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的：建立一種簡便、快捷、經(jīng)濟(jì)、高效臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取方法。 方法：臍帶剔除血管和外膜后,余下的膠凍狀組織,即沃頓膠(Wharton’s jelly, WJ)剪碎至1-2mm3大小,按一定比例均勻放置于含F(xiàn)asGrow培養(yǎng)基的6孔板中,37℃、5%的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待細(xì)胞游出后,用胰蛋白酶消化傳代培養(yǎng)并入液氮凍存。取第5代細(xì)胞行HE、Gimesa染色,觀察細(xì)胞形態(tài)。 結(jié)果：沃頓膠組織靜置培養(yǎng)7天左右,部分細(xì)胞從組織塊中游出,多為雙突起的長梭形、短棒狀或扁平形的成纖維樣細(xì)胞；14天左右,細(xì)胞形態(tài)變?yōu)榫坏募忓N形,細(xì)胞生長達(dá)到單位面積的70%-80%。傳代后可維持未分化狀態(tài)并穩(wěn)定增殖,細(xì)胞倍增時(shí)間為3d左右,體外增殖達(dá)20代以上；P3代以后,細(xì)胞形態(tài)較單一。復(fù)蘇后的細(xì)胞能很好生長,細(xì)胞形態(tài),生長特點(diǎn)與凍存前基本一致。 結(jié)論：種植法簡單、快捷、經(jīng)濟(jì)、高效,能從臍帶沃頓膠中分離出大量成纖維樣細(xì)胞。 目的：判斷從臍帶沃頓膠中分離出的成纖維樣細(xì)胞是否是臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞,并確定其分化潛能。 方法：取第5代細(xì)胞進(jìn)行免疫組化,檢測(cè)其免疫表型。用含地塞米松、維生素C、β-甘油磷酸鈉的FasGrow培養(yǎng)基誘導(dǎo)該成纖維樣細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,并進(jìn)行堿性磷酸酶染色、Von Kossa染色及四環(huán)素染色鑒定成骨細(xì)胞特性；用含地塞米松、維生素C、異丁基甲基黃嘌呤的FasGrow培養(yǎng)基誘導(dǎo)該成纖維樣細(xì)胞向成脂細(xì)胞分化,并進(jìn)行油紅O染色鑒定成脂細(xì)胞特性；用含β-巰基乙醇的FasGrow培養(yǎng)基誘導(dǎo)該成纖維樣細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化,并通過特異性抗體鑒定其分化能力。 結(jié)果：表面標(biāo)記分析顯示：CD44、CD105、CD133、MHC-Ⅰ呈陽性,CD34、CD45呈陰性,從臍帶沃頓膠中分離出的成纖維樣細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞；體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)表明：該細(xì)胞具有體外成脂肪、成骨和成神經(jīng)樣細(xì)胞分化的能力。 結(jié)論：從臍帶沃頓膠中分離出的大量成纖維樣細(xì)胞表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)記,并具有多向分化潛能,可作為組織工程中種子細(xì)胞的重要來源。
[Abstract]:Objective: to establish a simple, fast, economical and efficient method for obtaining mesenchymal stem cells from Wharton gum of umbilical cord. Methods: after the umbilical cord was removed from blood vessels and adventitia, the remaining gelatinous tissue, Whartonia jelly (WJJ), was shredded to the size of 1-2mm3. The cells were cultured in a CO2 incubator at 37 鈩，

本文編號(hào)：1481680