本文關(guān)鍵詞： 臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細胞 分離 培養(yǎng) 臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細胞 鑒定 誘導分化　出處：《中南大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目的：建立一種簡便、快捷、經(jīng)濟、高效臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細胞的獲取方法。 方法：臍帶剔除血管和外膜后,余下的膠凍狀組織,即沃頓膠(Wharton’s jelly, WJ)剪碎至1-2mm3大小,按一定比例均勻放置于含F(xiàn)asGrow培養(yǎng)基的6孔板中,37℃、5%的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待細胞游出后,用胰蛋白酶消化傳代培養(yǎng)并入液氮凍存。取第5代細胞行HE、Gimesa染色,觀察細胞形態(tài)。 結(jié)果：沃頓膠組織靜置培養(yǎng)7天左右,部分細胞從組織塊中游出,多為雙突起的長梭形、短棒狀或扁平形的成纖維樣細胞；14天左右,細胞形態(tài)變?yōu)榫坏募忓N形,細胞生長達到單位面積的70%-80%。傳代后可維持未分化狀態(tài)并穩(wěn)定增殖,細胞倍增時間為3d左右,體外增殖達20代以上；P3代以后,細胞形態(tài)較單一。復蘇后的細胞能很好生長,細胞形態(tài),生長特點與凍存前基本一致。 結(jié)論：種植法簡單、快捷、經(jīng)濟、高效,能從臍帶沃頓膠中分離出大量成纖維樣細胞。 目的：判斷從臍帶沃頓膠中分離出的成纖維樣細胞是否是臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細胞,并確定其分化潛能。 方法：取第5代細胞進行免疫組化,檢測其免疫表型。用含地塞米松、維生素C、β-甘油磷酸鈉的FasGrow培養(yǎng)基誘導該成纖維樣細胞向成骨細胞分化,并進行堿性磷酸酶染色、Von Kossa染色及四環(huán)素染色鑒定成骨細胞特性；用含地塞米松、維生素C、異丁基甲基黃嘌呤的FasGrow培養(yǎng)基誘導該成纖維樣細胞向成脂細胞分化,并進行油紅O染色鑒定成脂細胞特性；用含β-巰基乙醇的FasGrow培養(yǎng)基誘導該成纖維樣細胞向神經(jīng)樣細胞分化,并通過特異性抗體鑒定其分化能力。 結(jié)果：表面標記分析顯示：CD44、CD105、CD133、MHC-Ⅰ呈陽性,CD34、CD45呈陰性,從臍帶沃頓膠中分離出的成纖維樣細胞為間充質(zhì)干細胞；體外誘導實驗表明：該細胞具有體外成脂肪、成骨和成神經(jīng)樣細胞分化的能力。 結(jié)論：從臍帶沃頓膠中分離出的大量成纖維樣細胞表達間充質(zhì)干細胞的表面標記,并具有多向分化潛能,可作為組織工程中種子細胞的重要來源。
[Abstract]:Objective: to establish a simple, fast, economical and efficient method for obtaining mesenchymal stem cells from Wharton gum of umbilical cord. Methods: after the umbilical cord was removed from blood vessels and adventitia, the remaining gelatinous tissue, Whartonia jelly (WJJ), was shredded to the size of 1-2mm3. The cells were cultured in a CO2 incubator at 37 鈩，

本文編號：1481680