本文關(guān)鍵詞： 間質(zhì)干細(xì)胞 臍帶 衰老 造血干細(xì)胞 移植 造血重建　出處：《暨南大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的： 從人臍帶中分離、培養(yǎng)和純化人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUC-MSC),通過(guò)探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUC-MSC)對(duì)小鼠造血系統(tǒng)自然衰老的延緩作用,以進(jìn)一步了解其生物學(xué)特性,為開(kāi)拓其應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定 經(jīng)膠原酶Ⅳ消化和貼壁培養(yǎng)法,從足月新生兒臍帶組織中獲取hUC-MSC。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志,誘導(dǎo)hUC-MSC向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化,并以油紅O染色和堿性磷酸酶染色進(jìn)行分化鑒定,同時(shí)比較人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與成年小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖能力和成骨、成脂分化能力。 2.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠造血系統(tǒng)自然衰老的干預(yù)實(shí)驗(yàn) 由臍帶分離的hUC-MSC作為供體,6月齡的Balb／c小鼠作為受體。將小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。前者輸注hUC-MSC(5×105／只),每月1次,共6次；后者輸注生理鹽水。干預(yù)后觀察小鼠一般情況,于干預(yù)開(kāi)始后第3個(gè)月分別比較兩組的外周血象(WBC與Hb)、單側(cè)股骨骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)(BMNC)、成纖維細(xì)胞集落培養(yǎng)(CEU-F)、造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)(CFU-GM、CFU-E、CFU-MK)和外源性脾集落形成單位計(jì)數(shù)(CFU-S)；于干預(yù)后第6個(gè)月重復(fù)測(cè)定兩組上述指標(biāo),并同時(shí)進(jìn)行骨髓切片觀察、骨髓細(xì)胞的重建造血能力比較。 3.干預(yù)后第6個(gè)月,免疫組化檢測(cè)骨髓切片中細(xì)胞衰老分子p16蛋白、骨髓脂肪化關(guān)鍵分子PPARγ蛋白和植入的人hUC-MSC的表面分子人CD44。 結(jié)果： 1.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定 hUC-MSC強(qiáng)表達(dá)CD44、CD29,不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD14、CD34和CD45,不表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志CD31,不表達(dá)HLA-DR和CD106。向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)10d后,油紅O染色為陽(yáng)性；向成骨誘導(dǎo)3w,堿性磷酸酶染色陽(yáng)性。hUC-MSC的生長(zhǎng)增殖能力和成骨分化能力強(qiáng)于成年小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,而成脂分化能力弱于成年小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。2.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠造血系統(tǒng)自然衰老的干預(yù)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)組小鼠的一般存活情況優(yōu)于對(duì)照組。干預(yù)后第3個(gè)月時(shí),實(shí)驗(yàn)組的BMNC、CFU-GM和CFU-MK[(10.0±1.2)×106、35.1±6.5、57.9±12.4]多于對(duì)照組[(8.9±1.2)×106、27.5±8.3、49.9±12.1],而外周血象、CFU-F、CFU-E和CFU-S無(wú)明顯差別；干預(yù)后第6個(gè)月時(shí),除外周血象仍無(wú)差別外,其余的上述指標(biāo)實(shí)驗(yàn)組[(9.4±0.8)×106、51.1±12.8、31.6±8.6、25.6±6.9、52.4±11.6、40.4±5.9]均明顯高于對(duì)照組[(7.9±0.7)×106、40.0±9.3、21.3±9.6、19.0±6.1、41.1±9.2、34.9±5.9],這些指標(biāo)在干預(yù)前、第3個(gè)月、第6個(gè)月出現(xiàn)不斷下降的趨勢(shì),但實(shí)驗(yàn)組的下降速度明顯慢于對(duì)照組,差異有顯著性(p0.05)。骨髓切片顯示實(shí)驗(yàn)組造血組織多于對(duì)照組,骨髓細(xì)胞的造血重建能力也明顯優(yōu)于對(duì)照組。3.免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組骨髓切片中p16蛋白和PPARγ蛋白表達(dá)量明顯低于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組骨髓組織中人CD44陽(yáng)性表達(dá),而對(duì)照組為陰性。 結(jié)論： 1.成功的從人臍帶中分離出hUC-MSC,該細(xì)胞是一種增殖能力更強(qiáng)的間充質(zhì)干細(xì)胞。 2.hUC-MSC可以抑制小鼠骨髓脂肪化,延緩造血干細(xì)胞在衰老過(guò)程中集落生成活性下降的速度,具有抗衰老的作用。
[Abstract]:Objective:
Human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSC) were isolated from human umbilical cord and cultured and purified. The delaying effect of human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSC) on natural aging of mice hematopoietic system was explored, so as to further understand its biological characteristics, and provide experimental evidence for developing its application.
Method錛，

本文編號(hào)：1468941