本文關(guān)鍵詞： 抗死亡受體抗體 人源單鏈抗體 大容量噬菌體抗體庫(kù)　出處：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2015年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的從大容量天然噬菌體抗體庫(kù)中篩選抗人死亡受體5(DR5)單鏈抗體(sc Fv)并對(duì)其抗原結(jié)合活性進(jìn)行鑒定。方法以前期真核表達(dá)純化的DR5-Fc蛋白包被篩選管,從自主構(gòu)建的大容量天然噬菌體抗體庫(kù)中,通過(guò)4輪篩選過(guò)程獲得噬菌體抗體,采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、ELISA鑒定其抗原結(jié)合活性;DNA指紋圖譜分析和序列測(cè)定確定其抗體類型。結(jié)果經(jīng)過(guò)4輪篩選,獲得26株與DR5特異性結(jié)合的陽(yáng)性克隆,DNA指紋分析有4種不同的可變區(qū)片段;經(jīng)過(guò)基因測(cè)序,分析可變區(qū)基因的亞群,并將其制備成可溶性的抗體,進(jìn)一步用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)證實(shí)所獲得的抗體可特異性結(jié)合SW480細(xì)胞的DR5蛋白。結(jié)論利用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)成功獲得了特異性抗DR5的人源性sc Fv。
[Abstract]:Objective to screen the anti-human death receptor 5 DR5 single chain antibody (sc FV) from a large volume natural phage antibody library. The antigen-binding activity was identified. Methods the purified DR5-Fc protein was coated with a screening tube. Phage antibodies were obtained from a large volume natural phage antibody library constructed by ourselves and their antigen-binding activities were determined by immunocytochemical staining Elisa. Results after four rounds of screening, 26 positive clones with specific binding to DR5 had four different variable regions. After gene sequencing, the subpopulations of variable region genes were analyzed, and the soluble antibodies were prepared. It was further confirmed by immunocytochemistry that the obtained antibody could specifically bind to the DR5 protein of SW480 cells. Conclusion the phage antibody library technique has been successfully used to obtain the specific anti-#en2# human sc. Fv.
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)海軍臨床醫(yī)學(xué)院普通外科;海軍總醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)科;
【基金】：國(guó)家科學(xué)自然基金(31470897,81172119)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 死亡受體5(death receptor 5,DR5)[1]屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員,主要分布于肺癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、皮膚癌等多種腫瘤細(xì)胞的表面,在正常細(xì)胞很少或幾乎不表達(dá),當(dāng)DR5與其配體腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(tumor necrosis factor-related apopt

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1445868