本文關鍵詞： 抗死亡受體抗體 人源單鏈抗體 大容量噬菌體抗體庫　出處：《細胞與分子免疫學雜志》2015年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的從大容量天然噬菌體抗體庫中篩選抗人死亡受體5(DR5)單鏈抗體(sc Fv)并對其抗原結合活性進行鑒定。方法以前期真核表達純化的DR5-Fc蛋白包被篩選管,從自主構建的大容量天然噬菌體抗體庫中,通過4輪篩選過程獲得噬菌體抗體,采用免疫細胞化學染色、ELISA鑒定其抗原結合活性;DNA指紋圖譜分析和序列測定確定其抗體類型。結果經(jīng)過4輪篩選,獲得26株與DR5特異性結合的陽性克隆,DNA指紋分析有4種不同的可變區(qū)片段;經(jīng)過基因測序,分析可變區(qū)基因的亞群,并將其制備成可溶性的抗體,進一步用免疫細胞化學技術證實所獲得的抗體可特異性結合SW480細胞的DR5蛋白。結論利用噬菌體抗體庫技術成功獲得了特異性抗DR5的人源性sc Fv。
[Abstract]:Objective to screen the anti-human death receptor 5 DR5 single chain antibody (sc FV) from a large volume natural phage antibody library. The antigen-binding activity was identified. Methods the purified DR5-Fc protein was coated with a screening tube. Phage antibodies were obtained from a large volume natural phage antibody library constructed by ourselves and their antigen-binding activities were determined by immunocytochemical staining Elisa. Results after four rounds of screening, 26 positive clones with specific binding to DR5 had four different variable regions. After gene sequencing, the subpopulations of variable region genes were analyzed, and the soluble antibodies were prepared. It was further confirmed by immunocytochemistry that the obtained antibody could specifically bind to the DR5 protein of SW480 cells. Conclusion the phage antibody library technique has been successfully used to obtain the specific anti-#en2# human sc. Fv.
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學海軍臨床醫(yī)學院普通外科;海軍總醫(yī)院中心實驗科;
【基金】：國家科學自然基金(31470897,81172119)
【分類號】：R392
【正文快照】： 死亡受體5(death receptor 5,DR5)[1]屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員,主要分布于肺癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、結直腸癌、前列腺癌、皮膚癌等多種腫瘤細胞的表面,在正常細胞很少或幾乎不表達,當DR5與其配體腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(tumor necrosis factor-related apopt

【參考文獻】

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1 王欲曉;賈培媛;王玉霞;喬媛媛;楊日芳;周麗君;;人源抗梭曼過渡態(tài)類似物(P6)的抗體篩選[J];細胞與分子免疫學雜志;2010年03期

2 馬遠方,張軍,趙粵萍,楊東亮,陳有海;腫瘤細胞對TRAIL敏感性與其表面DR5表達水平的相關性研究[J];中華腫瘤雜志;2004年09期

【共引文獻】

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2 蔣效;何立東;王欲曉;丁立;吳成林;熊麗娟;周麗君;王育紅;;利用大型天然噬菌體抗體庫篩選抗死亡受體5人源抗體[J];細胞與分子免疫學雜志;2015年06期

3 韋利軍;于泉;劉軍;;RGD-TRAIL抗腫瘤作用的細胞篩選研究[J];中國新藥雜志;2015年09期

4 張少華;楊筱鳳;王莉;成碧萍;劉凱歌;;TRAIL聯(lián)合順鉑對卵巢癌細胞株CAOV3增殖抑制的實驗研究[J];山西醫(yī)科大學學報;2014年05期

5 張少華;楊筱鳳;吳勝軍;馬淑云;劉凱歌;成碧萍;;c-FLIP蛋白與卵巢癌細胞對TRAIL耐藥抵抗的關系[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2014年03期

6 王欲曉;解鵬;高榮凱;楊東玲;周麗君;;從人源大容量噬菌體抗體庫中篩選抗生存素抗體[J];轉化醫(yī)學雜志;2012年02期

7 馬紅冰;朱詩白;白慧玲;;HeLa及子宮頸癌組織中的DR5和bcl-2表達及其相關性[J];免疫學雜志;2011年12期

8 ;TNF related apoptosis-inducing ligand and its receptors in ocular tumors[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2011年05期

9 劉朝陽;高丹;徐帆洪;;TRAIL_(114～281)-IL-24融合蛋白的原核表達及其體外抗腫瘤細胞活性[J];中國生物制品學雜志;2010年09期

10 劉洪娟;汲晨鋒;高世勇;季宇彬;;死亡受體介導細胞凋亡的研究進展[J];中草藥;2009年S1期

【二級參考文獻】

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2 王欲曉;喬媛媛;周麗君;王琰;;從大容量抗體庫中篩選抗TNF-α人單鏈抗體[J];細胞與分子免疫學雜志;2008年09期

3 喬媛媛;王欲曉;周麗君;趙宇;王玉霞;趙曉航;王琰;;從大容量抗體庫中篩選抗蓖麻毒蛋白抗體[J];中國免疫學雜志;2007年10期

4 李桂英;朱迅;周立宏;鄒德生;郝東云;田宇;杜柏榕;;特異性抗人cyclin D1人源單鏈抗體的篩選[J];中國實驗診斷學;2006年11期

5 汪保安,陳曉穗,王琰,王欲曉,曲佳,周麗君;CDR3突變提高抗TNF-αFab段的親和力[J];免疫學雜志;2005年05期

6 王雷,喬媛媛,王剛,陳宇萍,楊軍,王琰,劉玉峰;從噬菌體抗體庫篩選人源性抗白細胞介素8抗體[J];細胞與分子免疫學雜志;2005年02期

7 馬遠方,楊東亮,陸士新,陳有海;DR5在TRAIL誘導Jurkat細胞凋亡中的作用[J];中國免疫學雜志;2004年05期

8 喬媛媛,王琰,陳曉穗,王欲曉,化冰;大容量噬菌體抗體庫的構建及鑒定[J];中華微生物學和免疫學雜志;2004年03期

9 王字玲,榮康泰,楊日芳,惲榴紅;γ-羥基膦酸酯誘導梭曼水解單鏈抗體酶[J];中國科學(B輯 化學);2000年04期

10 楊日芳,惲榴紅,王字玲,榮康泰;梭曼抗體酶研究Ⅱ:“潛過渡態(tài)”半抗原設計策略及其在梭曼抗體酶研究中的應用[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2000年02期

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3 王晉;羅文新;李利峰;陳瑛煒;王明橋;張軍;夏寧邵;;多樣性人源天然噬菌體抗體庫的構建及初步應用[J];細胞與分子免疫學雜志;2006年06期

4 杜東霞;吳劍;李小曼;朱振久;張冉;;噬菌體抗體庫淘篩方法的比較研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2009年04期

5 蔡家利;孫加燕;扈國達;王亮;丁森;劉勇;;噬菌體抗體庫技術應用研究進展[J];重慶理工大學學報(自然科學);2011年12期

6 肖天利,劉為紋,房殿春;噬菌體抗體庫的構建及抗AFP人單抗的篩選[J];第三軍醫(yī)大學學報;2000年07期

7 王剛,劉玉峰,王琰,化冰;噬菌體抗體庫幾種篩選方法的比較[J];第四軍醫(yī)大學學報;2001年16期

8 陳新華,溫浩,張耀新;噬菌體抗體庫技術的應用現(xiàn)狀[J];地方病通報;2001年04期

9 薛峰,潘萌,李衛(wèi)平,鄭捷;鼠抗尋常性天皰瘡抗原噬菌體抗體庫的構建與篩選[J];中國免疫學雜志;2002年09期

10 趙禹,侯秉璋,喬玲,劉嘉玉,張墨玲,李穎利,陳昆明;電轉化技術在噬菌體抗體庫構建中的應用[J];天津醫(yī)科大學學報;2002年04期

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1 車越;陳玉文;;噬菌體抗體庫篩選方法研究概述[A];2013年中國藥學會藥事管理專業(yè)委員會年會暨“醫(yī)藥安全與科學發(fā)展”學術論壇論文集（上冊）[C];2013年

2 張愛華;閉蘭;趙亞杰;端義坤;余模松;;人抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)Fab噬菌體抗體庫的構建、篩選及鑒定[A];預防醫(yī)學學科發(fā)展藍皮書·2008卷[C];2008年

3 董越華;胡占東;李常穎;暢繼武;朱鐵虹;;人源Fab噬菌體抗體庫的構建與抗精氨酸加壓素抗體的篩選[A];5TH全國中西醫(yī)結合內(nèi)分泌代謝病學術大會暨糖尿病論壇論文集[C];2012年

4 袁鉆寧;竇非;;人源噬菌體抗體庫的構建及抗Aβ寡聚體抗體的篩選[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2008年學術交流會論文摘要匯編[C];2008年

5 王紅利;舒建昌;;ScFv噬菌體抗體庫技術研究進展以及在腫瘤治療中的應用[A];廣東省肝臟病學會2007年年會論文集[C];2007年

6 閉蘭;張愛華;彭祥兵;王志友;張智;余模松;;從半合成噬菌體抗體庫篩選抗狂犬病毒人單鏈抗體[A];湖北省暨武漢市免疫學會第八屆學術會議論文集[C];2003年

7 崔宇杰;董寧征;龐愛明;白霞;阮長耿;;人源性Fab噬菌體抗體庫的構建和血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抗體的篩選、表達及鑒定[A];2005年華東六省一市血液病學學術會議暨浙江省血液病學學術年會論文匯編[C];2005年

8 高士爭;李衛(wèi)真;張曦;尹革芬;段剛;;抗脂肪細胞特異膜蛋白scFv噬菌體抗體庫的構建及可溶性表達[A];中國生物化學與分子生物學會農(nóng)業(yè)生物化學與分子生物學分會第六次學術交流會論文集[C];2004年

9 鄧寧;王宏;向軍儉;湯偉佳;;人噬菌體抗體庫的構建及人源性bFGF抗體的篩選[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術會議論文摘要[C];2006年

10 包福祥;何金生;張瑩;王鑫;李亦清;王小波;洪濤;;人源性天然抗體庫的構建及淀粉樣蛋白Aβ_(1-42)寡聚體抗體的篩選與初步鑒定[A];2008年全國抗衰老與老年癡呆學術會議論文集[C];2008年

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4 南清振;噬菌體抗體庫的構建及篩選大腸癌相關抗原抗體的研究[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

5 馬小兵;人天然Fab段噬菌體抗體庫的構建及抗gp96抗體的初步篩選[D];天津醫(yī)科大學;2006年

6 侯穎春;人源性全套噬菌體抗體庫的構建以及抗?jié)h坦病毒抗體的篩選與表達[D];第四軍醫(yī)大學;1997年

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1 趙東芝;氰戊菊酯噬菌體抗體庫的構建及篩選[D];天津科技大學;2013年

2 蔣效;死亡受體5在結腸癌組織的表達及抗死亡受體5新型人源抗體的篩選和鑒定[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

3 秦思遠;天然人源噬菌體抗體庫的構建與初步篩選[D];北京生物制品研究所;2009年

4 李曉琳;大容量非免疫人源性Fab噬菌體抗體庫的構建及初步篩選[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

5 余艷瓊;人源抗EV71病毒Fab噬菌體抗體庫的構建和篩選[D];福建醫(yī)科大學;2014年

6 任霞;抗血小板人源噬菌體抗體庫的構建和初步篩選[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2005年

7 汪治華;抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌體抗體庫的構建及初步鑒定[D];第四軍醫(yī)大學;2008年

8 吳煒霖;自身免疫抗體噬菌體庫的構建及初步鑒定[D];第二軍醫(yī)大學;2009年

9 潘博;構建大容量噬菌體抗體庫[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2010年

10 楊軍;黑素瘤患者噬菌體抗體庫的構建與篩選[D];第四軍醫(yī)大學;2004年

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