本文關鍵詞：火藥煙霧致支氣管上皮細胞損傷體外研究平臺建立及應用　出處：《中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 目的：1、設計制作煙霧發(fā)生裝置及煙霧與細胞反應裝置,組建煙霧吸入性損傷細胞分析平臺。2、使用煙霧吸入性損傷細胞分析平臺,檢測民用黑火藥煙霧對培養(yǎng)人支氣管上皮細胞(BEAS-2B)的損傷作用,研究其損傷機制。 方法：1、制作煙霧發(fā)生裝置：使用無線電磁加熱器引燃民用黑火藥,制作實驗煙霧。通過計算火藥燃燒率檢查火藥質量。通過檢測實驗煙霧對細胞的損傷作用,檢查實驗煙霧質量。2、制作煙霧與細胞反應裝置：裝置內溫度恒定為37。C,濕度恒定≥90%。3、細胞與煙霧反應影響因素：(1)細胞密度：(2)細胞與煙霧接觸方式；(3)煙霧量大��；(4)實驗后檢測時間：(5)細胞培養(yǎng)液體積；(6)發(fā)煙材料燃燒速度：4、使用劑量為0.5g、1g、2g、4g火藥制作實驗煙霧,與細胞接觸10min后,觀察其對細胞損傷作用大��；使用相同劑量為2g火藥制作實驗煙霧,分別與細胞接觸5min、10min、15min、20min,觀察細胞損傷情況。5、觀察煙霧損傷細胞內ROS含量,使用DHE染色,熒光顯微鏡下觀察拍照,IPP軟件進行數(shù)據(jù)處理分析。6、觀察煙霧損傷細胞核內DNA損傷情況,使用單細胞凝膠電泳(又稱彗星試驗)檢測火藥煙霧造成的細胞核內DNA斷裂情況。熒光顯微鏡下觀察拍照,使用casp軟件進行數(shù)據(jù)處理分析。7、用ELISA方法檢測煙霧損傷細胞分泌IL-8的情況。 結果：1、火藥質量檢測變異系數(shù)5%。煙霧質量檢測變異系數(shù)10%。2、火藥與細胞反應的影響因素,適宜火藥檢測指標為(1)細胞密度,12孔板,每孔細胞量為4×104個。(2)細胞與煙霧接觸方式,使用濾網(wǎng)。(3)煙霧總體積10L。(4)細胞培養(yǎng)液體積為1ml。(5)檢測時間為24h。(6)火藥5s內燃盡。3、實驗煙霧火藥劑量增加及與細胞接觸時間的延長,對細胞的損傷加重。4、熒光染色檢測單個細胞內ROS含量,隨著細胞活性的降低而升高。5、單細胞凝膠電泳檢測細胞核內DNA斷裂,隨著細胞活性降低而加重。6、細胞分泌的IL-8量隨著單個細胞損傷的加重而升高。 結論：設計制作的發(fā)煙裝置能夠穩(wěn)定安全制作實驗煙霧,煙霧與細胞反應裝置能夠實現(xiàn)煙霧致細胞損傷中煙霧濃度、接觸時間與損傷效應呈正相關�；鹚師熿F對支氣管上皮細胞有損傷作用,損傷機制與ROS含量增加、細胞核內DNA斷裂及IL-8分泌增多相關。
[Abstract]:Objective to design and manufacture smoke generating device and smoke and cell reaction device, to construct smoke inhalation injury cell analysis platform .2and to use smoke inhalation injury cell analysis platform. To investigate the damage mechanism of black powder smoke on cultured human bronchial epithelial cells (BEAS-2B). Method 1, make smoke generator: use wireless electromagnetic heater to ignite black powder for civil use. To make experimental smoke. To check the mass of gunpowder by calculating the burning rate of gunpowder. To check the quality of experimental smoke by detecting the damage of smoke to cells. 2. The device of smoke and cell reaction was made: the temperature of the device was 37.C, the humidity was 鈮，

本文編號：1435498