本文關(guān)鍵詞：編碼流感病毒核蛋白和基質(zhì)蛋白DNA疫苗的免疫保護(hù)作用研究　出處：《湖南師范大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： DNA疫苗是最近幾年從基因治療研究領(lǐng)域發(fā)展起來(lái)的一種新型疫苗,它能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生持久的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答,具有預(yù)防和治療疾病的作用。 流感病毒的核蛋白(nucleoprotein,NP)和基質(zhì)蛋白(matrix proteinM)具有型特異性,根據(jù)NP和M的不同,可以將流感病毒分為A、B、C三型,且它們的核苷酸序列非常保守。本實(shí)驗(yàn)將A型流感病毒A/PR/8/34(PR8)(H1N1)的流感病毒核蛋白基因(NP)和基質(zhì)蛋白基因(M)克隆入真核表達(dá)載體中,構(gòu)建的DNA疫苗用小鼠模型來(lái)評(píng)估NP和M DNA疫苗的免疫保護(hù)作用,期望能在預(yù)防流感上取得一些成果。 實(shí)驗(yàn)中共構(gòu)建了NP基因(長(zhǎng)1497 bp,表達(dá)498個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì))、M1基因(長(zhǎng)759 bp,表達(dá)252個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì))和M2基因(長(zhǎng)322 bp,表達(dá)97個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì))三個(gè)基因的核酸疫苗,疫苗構(gòu)建鑒定正確后,通過(guò)大量提取質(zhì)粒制備核酸疫苗。并將實(shí)驗(yàn)按下述組別進(jìn)行免疫:1)用NP核酸疫苗對(duì)小鼠進(jìn)行二次、三次、四次、五次、六次免疫;2)用M1、M2核酸疫苗對(duì)小鼠分別進(jìn)行二次、三次、四次、五次、六次免疫(M2只進(jìn)行了四次、五次和六次免疫);3)用NP+M1(NP和M1 DNA疫苗混合)核酸疫苗對(duì)小鼠分別進(jìn)行二次、三次、四次、五次、六次免疫。采集每次免疫后小鼠的血清,并在免疫完后一周進(jìn)行致死量同型流感病毒感染實(shí)驗(yàn),病毒感染后觀察小鼠的體重丟失率和存活率,通過(guò)小鼠體內(nèi)抗體滴度,存活率和體重丟失率三個(gè)指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)疫苗的免疫保護(hù)效果。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,血清中抗M1 IgG抗體含量隨著免疫次數(shù)的增加而增高,免疫六次時(shí)抗體含量最高,其它免疫組情況也大致相同,隨著免疫次數(shù)的增長(zhǎng)抗體呈上升趨勢(shì);在攻毒后的觀察期中,體重丟失率M2＞M1＞NP＞(NP+M1);NP DNA疫苗在六次免疫后能提供50%以上的保護(hù);M1 DNA疫苗在六次免疫后能對(duì)小鼠提供約40%保護(hù);M2 DNA疫苗不能為小鼠提供保護(hù);(NP+M1)DNA疫苗免疫的小鼠保護(hù)效果最好,只三次免疫就能提供80%以上的保護(hù),它的保護(hù)效果要比單獨(dú)免疫NP和M1好。
[Abstract]:DNA vaccine is a new vaccine developed in recent years from the field of gene therapy. It can induce persistent humoral and cellular immune responses, and has the function of preventing and treating diseases.
The influenza virus nucleoprotein (nucleoprotein, NP) and matrix protein (matrix proteinM) with high specificity, according to NP and M is different, can be divided into influenza virus A, B, C three, and their nucleotide sequences are highly conserved. The influenza virus A A/PR/8/34 (PR8) (H1N1) the influenza virus nucleoprotein gene (NP) and matrix protein (M) gene was cloned into the eukaryotic expression vector, constructed DNA vaccine in mice and NP model to evaluate the protective immunity of M DNA vaccine, hoping to get some results in the prevention of influenza.
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本文編號(hào)：1427315