本文關(guān)鍵詞：腎移植受者HLA-G5的基礎(chǔ)和臨床研究　出處：《中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院》2010年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 研究背景：HLA-G,非經(jīng)典MHC-Ib類分子,具有多重免疫調(diào)節(jié)特性。在生理條件下,HLA-G表達(dá)于妊娠期的絨毛膜外的細(xì)胞滋養(yǎng)層,在誘導(dǎo)和維持母胎耐受機(jī)制中發(fā)揮重要的作用。在自身免疫性疾病、腫瘤、病毒感染、器官移植等情況下,HLA-G在血清、血漿中均有不同水平表達(dá),其表現(xiàn)出的免疫調(diào)節(jié)作用也受到越來越多的關(guān)注。 目的：本課題通過對比腎移植受者術(shù)前、術(shù)后與健康對照組HLA-G5的表達(dá),了解HLA-G5與移植耐受的相關(guān)性以及不同免疫抑制劑對HLA-G5在’腎移植受者體內(nèi)表達(dá)影響；通過分析對比HLA-G5表達(dá)高低兩組的不同臨床表現(xiàn),研究HLA-G5在臨床監(jiān)測排斥反應(yīng)、腎功能恢復(fù)、移植腎功能延遲恢復(fù)中的意義,對臨床免疫抑制劑的應(yīng)用以及減少免疫抑制劑用量及毒副作用有何指導(dǎo)作用；通過HLA-G5與腎移植受者體內(nèi)的CD4+CD25+Treg細(xì)胞表達(dá)的相關(guān)性等,探討HLA-G5與移植物排斥反應(yīng)和誘導(dǎo)免疫耐受作用機(jī)制。 方法：應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法(ELISA)檢測HLA-G5的在腎移植受者及健康對照組內(nèi)表達(dá)情況；應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測HLA-G5mRNA在腎移植受者體內(nèi)表達(dá)情況；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4+CD25+Treg細(xì)胞表達(dá)及HLA-G5+T細(xì)胞檢測;應(yīng)用體外單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)一步探討HLA-G5的免疫抑制性；應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計臨床及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 結(jié)果：ELISA檢測健康對照組、腎移植術(shù)前組、腎移植后受者組HLA-G5值,分別為,健康對照組4.922±7.305 ng/ml,腎移植術(shù)前組152.575±64.462 ng/ml,腎移植后84天組210.232±107.285 ng/ml,三組間兩兩比較P值＜0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,HLA-G5的表達(dá)隨病程階段呈現(xiàn)先增高后降低趨勢；RT-PCR結(jié)果顯示HLA-G5mRNA條帶密度隨病程變化而變化,其密度呈現(xiàn)增高后降低至術(shù)前水平趨勢；無論是Tac組還是CsA組,HLA-G5表達(dá)水平隨病程變化而變化,HLA-G5術(shù)后1天水平較術(shù)前下降,在術(shù)后14-28天HLA-G5表達(dá)水平較高,之后水平呈下降至術(shù)前趨勢,兩組間HLA-G5表達(dá)水平差異不顯著,P值＞0.05；移植術(shù)后早期腎功能恢復(fù)與HLA-G5表達(dá)水平相關(guān)性研究結(jié)果顯示：HLA-G5高表達(dá)組( 300ng/ml)血肌酐下降斜率為193.779±80.845 umol/天,而HLA-G5低表達(dá)組(100ng/ml)血肌酐下降斜率為29.863±25.465 umol/天,P＜0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；腎移植術(shù)后血紅蛋白恢復(fù)至正常(或術(shù)前水平)所需時間在兩組間比較,HLA-G5高表達(dá)組為21.556±6.464天,而低表達(dá)組為80.143±38.555天,P＜0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；在Tac+MMF+Pred用藥組中HLA-G5高表達(dá)組免疫抑制劑減藥斜率為8.58 0±4.690,低表達(dá)組為1.433±0.752,P值＜0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,在CsA+MMF+Pred用藥組中HLA-G5高表達(dá)組免疫抑制劑減藥斜率為3.633±1.041,低表達(dá)組為1.810±0.183,P值＜0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,；HLA-G5高表達(dá)組無一例發(fā)生AR,而HLA-G5低表達(dá)組發(fā)生率43%,P值＜0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；HLA-G5高表達(dá)組術(shù)后1天、4天、7天CD4+CD25+Treg細(xì)胞出現(xiàn)頻率與術(shù)前比較呈下降趨勢,P值＜0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,術(shù)后14天、28天、56天、84天CD4+CD25+Treg細(xì)胞出現(xiàn)頻率呈逐漸回升至術(shù)前水平趨勢,而HLA-G5低表達(dá)組中,術(shù)后1天、4天、7天、14天、28天、56天、84天CD4+CD25+Treg細(xì)胞出現(xiàn)頻率與術(shù)前比較維持在低位水平,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；腎移植供、受者單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HLA-G+組淋巴細(xì)胞增殖明顯低于空白對照組和HLA-G-組,P值＜0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；HLA-G5高表達(dá)組無一例發(fā)生DGF,而低表達(dá)組發(fā)生率為57%,P值＜0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：HLA-G5在健康人群中可有表達(dá),腎移植術(shù)前組、腎移植術(shù)后組濃度明顯高于健康對照組,差異顯著；基因水平HLA-G5的表達(dá),隨病程階段不同表達(dá)也不同,不同時間點(diǎn)HLA-G5mRNA條帶的相對豐度值呈先升高后降低趨勢；無論是Tac組還是CsA組,HLA-G5表達(dá)水平隨病程呈先增高后降低趨勢,免疫抑制劑可能參與了誘導(dǎo)HLA-G5表達(dá)；腎移植術(shù)后早期HLA-G5表達(dá)水平與移植腎功能早期恢復(fù)密切相關(guān),HLA-G5高表達(dá)者血肌酐下降速率較HLA-G5低表達(dá)者為快,且血紅蛋白恢復(fù)至正常水平或術(shù)前水平所需時間短,急性排斥反應(yīng)發(fā)生率低；腎移植術(shù)后早期HLA-G5高表達(dá)者免疫抑制劑減藥速率較HLA-G5低表達(dá)者為快,在指導(dǎo)臨床用藥方面有一定的指導(dǎo)意義；HLA-G5可能通過誘導(dǎo)CD4+CD25+Treg細(xì)胞誘導(dǎo)移植物功能耐受,而具體機(jī)制有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究；DGF的發(fā)生與HLA-G5表達(dá)水平密切相關(guān),HLA-G5可能通過減少急性排斥反應(yīng)這一因素減少DGF的發(fā)生。
[Abstract]:Background: HLA-G, a non classical class MHC-Ib molecules with multiple immunomodulatory properties. Under physiological conditions, the expression of HLA-G in chorionic pregnancy outside the cytotrophoblast cells, play an important role in the induction and maintenance of maternal fetal tolerance mechanism. In autoimmune diseases, cancer, viral infection, organ transplantation cases the expression of HLA-G in serum, plasma, have different levels of immune function which showed that has attracted more and more attention.
Objective: this topic through the comparison of renal transplantation patients, postoperative and healthy control group HLA-G5 expression, to understand the relationship between HLA-G5 and transplantation tolerance and different immunosuppressive agents on HLA-G5 recipients' influence in the expression of kidney transplantation; through the comparative analysis of HLA-G5 expression in different clinical manifestations of the two groups of HLA-G5 in rejection clinical monitoring and recovery of renal function, delay in the recovery of renal transplantation function, clinical application of immunosuppressive agents and reduce the dosage of immunosuppressant and side effects have a guiding role; through HLA-G5 and renal transplantation in vivo correlation between the expression of CD4+CD25+Treg cells, and explore the HLA-G5 graft rejection and induce immune tolerance. The mechanism.
Methods: using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) detection of HLA-G5 in renal transplantation expression and healthy control group; the application of RT-PCR technology to detect HLA-G5mRNA expression in recipients of renal transplantation; the application of flow cytometry to detect the expression of CD4+CD25+Treg and HLA-G5+T cells; the application of mixed lymphocyte immune to further explore HLA-G5 inhibition of cultivation technology; application of SPSS13.0 statistical software for clinical and experimental data.
Results: ELISA was detected in healthy control group, before renal transplantation recipients after renal transplantation group, HLA-G5 group, respectively, healthy control group 4.922 + 7.305 ng/ml before renal transplantation group 152.575 + 64.462 ng/ml, 84 days after renal transplantation group 210.232 + 107.285 ng/ml, three groups of comparison between the 22 P < 0.01, the difference was statistically significant, HLA-G5 expression decreased after the first increase with the duration of stages; RT-PCR results showed that the HLA-G5mRNA band density with the course of change, the density is increased and then decreased trend to the preoperative level of either Tac or CsA; group group, the expression level of HLA-G5 varies with the changes of course, after HLA-G5 the 1 day the level decreased, the high expression level of 14-28 after HLA-G5 days, then decreased to the preoperative trend, the expression level of HLA-G5 between the two groups had no significant difference, P value is greater than 0.05; the expression of HLA-G5 and water recovery of early renal function after transplantation Flat association study results show that: HLA-G5 high expression group (300ng/ml) serum creatinine decreased slope of 193.779 + 80.845 umol/ days, and HLA-G5 low expression group (100ng/ml) serum creatinine decreased slope of 29.863 + 25.465 umol/ days, P < 0.01, the difference was statistically significant; after renal transplantation (or hemoglobin recovery to normal before operation the level of required) compares the time between the two groups in the HLA-G5 high expression group was 21.556 + 6.464 days, while the low expression group was 80.143 + 38.555 days, P < 0.05, the difference was statistically significant; high HLA-G5 in Tac+MMF+Pred group expressed group immunosuppressant drug reduction slope is 8.580 + 4.690, low expression group 1.433 + 0.752, P < 0.01, the difference was statistically significant, high HLA-G5 in the CsA+MMF+Pred group in the expression group of immunosuppressive drug reduction slope is 3.633 + 1.041, the low expression group is 1.810 + 0.183, P < 0.05, the difference was statistically significant, HLA-G5 high table; As a group of patients with AR, and the low expression of HLA-G5 group was 43%, P < 0.05, the difference was statistically significant; HLA-G5 high expression in 1 day group after 4 days, 7 days CD4+CD25+Treg cell frequency compared with preoperative decreased, the P value is less than 0.05, the difference was statistically significant, 14 day, after 28 days, 56 days, 84 days CD4+CD25+Treg cell frequency was gradually recovered to the preoperative level trend, and the low expression of HLA-G5 group, the 1 day, after 4 days, 7 days, 14 days, 28 days, 56 days, 84 days CD4+CD25+Treg cell frequency compared with preoperative in maintenance the low water level, the difference was statistically significant; for kidney transplantation recipients, one-way mixed lymphocyte culture proliferation assay showed that the lymphocyte proliferation in group HLA-G+ was significantly lower than the blank control group and HLA-G- group, P < 0.05, the difference was statistically significant; the high expression of HLA-G5 group with no occurrence of DGF, while the low expression group the incidence rate was 57 The value of P was less than 0.05, and the difference was statistically significant.
Conclusion: HLA-G5 in healthy people can be expressed before renal transplantation group after renal transplantation group was significantly higher than that in the healthy control group, the difference was significant; gene expression level of HLA-G5, with the duration of different stages of expression are different, the relative abundance of HLA-G5mRNA at different time point value of bands increased at first and then decreased; no matter the Tac group and CsA group, the expression level of HLA-G5 decreased after the first increase with the duration is, immunosuppression may be involved in the induction of HLA-G5 expression; the early stage of renal transplantation and transplantation of HLA-G5 expression in the early recovery of renal function is closely related to the high expression of HLA-G5 blood creatinine reduction rate than the low expression of HLA-G5 was faster, and the recovery of hemoglobin to normal levels or preoperative levels required for a short time, low rate of acute rejection after renal transplantation; early high expression of HLA-G5 of immunosuppressive drug reduction for low expression rate is HLA-G5 Fast, has a certain significance in guiding the clinical use of drugs; HLA-G5 could induce CD4+CD25+Treg cell tolerance induced graft function, and the specific mechanism needs further study; closely related to the expression level of DGF and HLA-G5, HLA-G5 can reduce the acute rejection of the factors to reduce the incidence of DGF.

【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

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本文編號：1419410