本文關(guān)鍵詞：基于漢遜酵母細(xì)胞的新型乙肝表面抗原疫苗的研究　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2009年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 乙肝病毒感染 Th1型免疫反應(yīng) 酵母細(xì)胞 新型佐劑 乙肝疫苗

【摘要】： 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是世界性的公共衛(wèi)生問題,其所致的慢性肝炎及其并發(fā)癥嚴(yán)重危害了人類健康。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球有3.7億左右的HBV感染者或病毒攜帶者。每年至少有100萬人死于慢性肝臟疾病,包括肝硬化和肝癌。目前,臨床上對(duì)慢性肝炎的治療主要是采用干擾素α和核苷類藥物。但是,治療效果不理想。 疫苗是控制乙肝傳播最有效的手段。目前國(guó)內(nèi)外使用的乙肝疫苗主要由兩部分組成,乙肝表面抗原(HBsAg)和佐劑,單獨(dú)乙肝表面抗原(HBsAg)的免疫原性較弱,佐劑用于增強(qiáng)抗原的免疫原性。目前被批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床的佐劑只有氫氧化鋁(alum),其主要增強(qiáng)Th2型免疫應(yīng)答,以體液免疫為主。 對(duì)于HBV慢性感染者而言,機(jī)體免疫反應(yīng)不能有效清除病原體,一般認(rèn)為機(jī)體對(duì)HBV產(chǎn)生了免疫耐受。打破慢性HBV感染的免疫耐受狀態(tài),有效地激活機(jī)體特異性體液免疫和細(xì)胞免疫是治療慢性肝炎的關(guān)鍵之一。研究表明,Th1型免疫以較強(qiáng)的細(xì)胞免疫和適度的體液免疫反應(yīng)為特點(diǎn),在宿主抵抗病毒、胞內(nèi)菌感染方面起重要作用。因此,開發(fā)一種安全的,能夠增強(qiáng)Th1型免疫應(yīng)答的佐劑,對(duì)控制乙肝具有重要的意義。 TOLL樣受體(TLRs)屬于病原相關(guān)分子模式識(shí)別受體(PRR),PRR識(shí)別某些病原微生物或其產(chǎn)物所共有的高度保守的特定分子結(jié)構(gòu)稱為病原相關(guān)分子模式(PAMP)。TLRs與PAMP相互作用,不僅能激活先天性免疫應(yīng)答,而且還能促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞(APCs)識(shí)別病原體,產(chǎn)生共刺激信號(hào)而啟動(dòng)獲得性免疫反應(yīng),是聯(lián)系先天免疫和獲得性免疫的橋梁。現(xiàn)在已經(jīng)有11種不同的TLRs配體被識(shí)別,許多種TLRs配體被用作疫苗佐劑的研究,如R.848和CpG分別是TLR7和TLR9的配體。 樹突狀細(xì)胞(DCs)表面表達(dá)多種TLRs,在識(shí)別病原微生物表面PAMP及基因如CpG-ODN、單鏈和雙鏈RNA方面起重要作用。激活后的DCs轉(zhuǎn)向成熟階段,MHCⅠ、Ⅱ類分子及共刺激分子CD40,CD80,CD86表達(dá)增高,并分泌IL-12、IFN-γ等細(xì)胞因子,促進(jìn)NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞吞噬殺傷病原體的活性,增強(qiáng)天然免疫應(yīng)答。此時(shí)DCs抗原攝取能力大為降低,而抗原提呈能力增強(qiáng),DCs遷移至次級(jí)淋巴組織,將抗原以MHC-抗原肽形式遞呈給T淋巴細(xì)胞,激活特異性細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)。TLRs還可決定獲得性免疫的類型,大多數(shù)TLRs配體能夠誘生Th1型獲得性免疫反應(yīng)。 已有研究表明,酵母細(xì)胞壁有很多佐劑成分,其能夠與DCs和巨噬細(xì)胞受體相互作用,這些受體包括TLR-2,TLR-4,TLR-6,CD14,Dectin-1,Dectin-2,DEC-205和甘露糖受體家族。酵母細(xì)胞被DCs吞噬以后,可以上調(diào)很多細(xì)胞表面分子的表達(dá),包括粘附分子(ICAM-1,CD54),協(xié)同刺激因子(B7-1,B7-2,CD80,CD86),MHCⅠ和MHCⅡ類分子,并刺激細(xì)胞因子IL-12的分泌。研究表明,釀酒酵母本身沒有致病性,臨床研究表明,熱滅活的重組酵母在機(jī)體中沒有明顯的副作用。利用熱滅活的表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原的釀酒酵母細(xì)胞免疫小鼠能夠產(chǎn)生針對(duì)腫瘤抗原特異性的T細(xì)胞免疫應(yīng)答和抗腫瘤活性。腫瘤相關(guān)抗原可通過MHCⅠ和MHCⅡ類分子交叉提呈,從而產(chǎn)生針對(duì)腫瘤相關(guān)抗原特異性Th和CTL介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。然而,釀酒酵母表達(dá)體系中還有一些不足之處,例如釀酒酵母產(chǎn)生的糖基化蛋白中,N-連接的聚糖可以產(chǎn)生過敏反應(yīng)。此外,這種酵母所用碳源有限。漢遜酵母是一種甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母,其能克服傳統(tǒng)酵母的不足,在漢遜酵母表達(dá)的糖蛋白中,N-連接的聚糖不會(huì)產(chǎn)生過敏反應(yīng)。漢遜酵母的碳源比較豐富,其蛋白的產(chǎn)量比傳統(tǒng)的釀酒酵母高,并且漢遜酵母本身沒有致病性,可以推測(cè)漢遜酵母細(xì)胞可能是一種更加安全有效的疫苗佐劑。 為評(píng)價(jià)重組漢遜酵母在疫苗佐劑中的應(yīng)用和漢遜酵母的特性,本研究擬應(yīng)用熱滅活的表達(dá)乙肝表面抗原的漢遜酵母細(xì)胞(Yeast-HBsAg)和酵母細(xì)胞空載體,研究在小鼠體內(nèi)誘生HBsAg特異性T細(xì)胞和B細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力。首先設(shè)計(jì)表達(dá)乙肝表面抗原的漢遜酵母細(xì)胞。為了提高漢遜酵母細(xì)胞HBsAg的表達(dá)水平,對(duì)HBsAg基因密碼子進(jìn)行優(yōu)化,盡量采用漢遜酵母細(xì)胞偏愛的密碼子。PCR方法擴(kuò)增出HBsAg的基因序列,將基因序列亞克隆到多拷貝表達(dá)載體中,然后將其電轉(zhuǎn)到漢遜酵母細(xì)胞中,誘導(dǎo)表達(dá)HBsAg。經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),HBsAg主要表達(dá)在漢遜酵母細(xì)胞內(nèi)。為比較分析酵母細(xì)胞成分的佐劑作用,同時(shí)制備熱滅活的表達(dá)乙肝表面抗原的漢遜酵母細(xì)胞(Yeast-HBsAg)和漢遜酵母細(xì)胞空載體(Yeast vector)。 為評(píng)估上述制品在小鼠體內(nèi)誘生免疫應(yīng)答的水平和特征,取6周齡BALB/c雌鼠,隨機(jī)分為5組,每組10只小鼠,分別利用PBS,HBsAg,HBsAg+alum(以alum作為HBsAg佐劑),Yeast vector,Yeast-HBsAg免疫小鼠。每4周免疫1次,共免疫3次。初次免疫2周后開始眼眶后靜脈叢插管采血,每隔2周采血1次。稀釋不同免疫組小鼠血清,然后用ELISA法檢測(cè)血清中anti-HBs IgG以及IgG1,IgG2a的抗體滴度。第3次免疫后1周,脫頸椎處死小鼠,無菌條件下摘取脾臟,然后用氯化銨溶液裂解紅細(xì)胞,胎盤蘭染色,脾臟細(xì)胞計(jì)數(shù)。將小鼠脾臟細(xì)胞調(diào)整為2×10~6/ml,作細(xì)胞表面分子染色,包括CD11c,CD80,CD86,MHCⅡ;CD3,CD4,CD8。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠脾臟DCs(CD11c),以及共表達(dá)CD80,CD86和MHCⅡ的DCs;小鼠脾臟T(CD3~+)細(xì)胞,以及CD4~+T,CD8~+T細(xì)胞,CellQuest軟件分析結(jié)果。計(jì)算DCs,T細(xì)胞占全脾臟細(xì)胞的比例,以及CD4~+T,CD8~+T細(xì)胞在全脾臟T細(xì)胞中的比例。將脾臟細(xì)胞調(diào)整為4×10~6/ml,加入乙肝表面抗原(終濃度20μg/ml)刺激72小時(shí),收集上清,ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ和IL-4的水平。另一方面,將脾臟細(xì)胞調(diào)整為4×10~6/ml,加入乙肝表面抗原(終濃度20μg/ml)刺激72小時(shí),加入CCK-8溶液,檢測(cè)脾臟細(xì)胞的增殖。此外,進(jìn)一步用HBsAg抗原刺激脾臟細(xì)胞,做細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子IFN-γ染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟CD4~+T,CD8~+T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的水平,CellQuest分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。進(jìn)一步將小鼠脾臟細(xì)胞調(diào)整為2×10~6/ml,利用滅活的P815-s刺激脾臟細(xì)胞,檢測(cè)各組小鼠脾臟細(xì)胞的特異性殺傷活性。 結(jié)果表明,Yeast-HBsAg免疫的小鼠全脾臟細(xì)胞數(shù)是HBsAg單獨(dú)免疫組的5.6倍,脾臟DCs是HBsAg單獨(dú)免疫組的13.6倍,脾臟T細(xì)胞數(shù)是HBsAg單獨(dú)免疫組的4.4倍。HBsAg+alum免疫小鼠的全脾臟細(xì)胞數(shù),DCs及T細(xì)胞數(shù)均為HBsAg單獨(dú)免疫組的2.2倍左右。因此,與alum相比,漢遜酵母細(xì)胞能夠誘導(dǎo)更多的T細(xì)胞,DCs向脾臟聚集。 Yeast-HBsAg能夠提高小鼠脾臟細(xì)胞表達(dá)CD80,CD86,MHC classⅡ的DCs比例。而HBsAg,HBsAg+alum對(duì)小鼠脾臟DCs比例沒有顯著的影響。Yeast vector和Yeast-HBsAg對(duì)小鼠全脾臟細(xì)胞數(shù)、DCs、T細(xì)胞數(shù)以及表達(dá)CD80,CD86,MHC classⅡ的DCs比例的影響沒有顯著差異,因此,Yeast-HBsAg對(duì)脾臟免疫細(xì)胞的影響主要是漢遜酵母細(xì)胞的作用。 Yeast-HBsAg免疫的小鼠能夠產(chǎn)生較高水平的IgG,IgG1,IgG2a抗體。初次免疫6周后,Yeast-HBsAg免疫小鼠產(chǎn)生的抗體是HBsAg單獨(dú)免疫組的50倍,HBsAg+alum免疫小鼠產(chǎn)生的抗體是HBsAg單獨(dú)免疫組的12倍。因此,Yeast-HBsAg免疫小鼠產(chǎn)生的抗體明顯高于HBsAg+alum組。與HBsAg單獨(dú)免疫組相比,Yeast-HBsAg能夠提高血清IgG2a/IgG1抗體的比值(HBsAg免疫組為0.195,Yeast-HBsAg免疫組為0.522),表明Yeast-HBsAg可以使免疫反應(yīng)偏向Th1方向。而alum作為HBsAg的佐劑不能夠提高IgG2a/IgG1的比值。Yeast-HBsAg免疫小鼠的脾臟細(xì)胞不但能夠發(fā)生明顯的增殖,而且能釋放大量的HBsAg特異性IFN-γ和IL-4。此外,脾臟CD4~+T和CD8~+T細(xì)胞均能夠產(chǎn)生IFN-γ。而HBsAg+alum免疫組沒有檢測(cè)到T細(xì)胞免疫反應(yīng)。 以上結(jié)果表明,Yeast-HBsAg既能夠誘導(dǎo)Th1方向的免疫應(yīng)答,也可以增強(qiáng)Th2方向的免疫應(yīng)答,同時(shí),Yeast-HBsAg還能夠促進(jìn)DCs成熟。而alum作為HBsAg的佐劑,只能增強(qiáng)Th2方向的免疫反應(yīng),不能誘生Th1方向的免疫應(yīng)答,不能促進(jìn)DCs成熟。 為單獨(dú)評(píng)價(jià)漢遜酵母的疫苗佐劑作用,將酵母細(xì)胞空載體(Yeast vector)與HBsAg組合[以(HBsAg+yeast)表示HBsAg與漢遜酵母細(xì)胞空載體(Yeast vector)混合]免疫小鼠,研究HBsAg+yeast在小鼠體內(nèi)的免疫反應(yīng)。取6周齡BALB/c雌鼠隨機(jī)分為5組,每組10只小鼠,分別利用PBS,HBsAg,HBsAg+alum,Yeast vector,HBsAg+yeast免疫小鼠。每4周免疫1次,共免疫3次。眼眶后靜脈叢插管采血,ELISA法檢測(cè)血清中anti-HBs IgG以及IgG1,IgG2a抗體的滴度。第3次免疫后1周,處死小鼠,分離脾臟細(xì)胞,HBsAg抗原刺激,分別檢測(cè)脾臟細(xì)胞增殖,IFN-γ和IL-4的分泌及脾臟CD4~+T,CD8~+T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的水平。 試驗(yàn)結(jié)果表明,HBsAg+yeast免疫的小鼠能夠產(chǎn)生較高水平的IgG,IgG1,IgG2a抗體。HBsAg+yeast免疫小鼠的脾臟細(xì)胞不但能夠產(chǎn)生較多的IFN-γ和IL-4,而且發(fā)生了明顯的增殖。脾臟CD4~+T,CD8~+T細(xì)胞均能夠產(chǎn)生IFN-γ。HBsAg+yeast既能夠誘生Th1方向的免疫應(yīng)答,也可以增強(qiáng)Th2方向的免疫應(yīng)答。上述結(jié)果說明,HBsAg+yeast在小鼠體內(nèi)的免疫反應(yīng)和Yeast-HBsAg相近。提示漢遜酵母細(xì)胞可單獨(dú)發(fā)揮Th1型疫苗佐劑作用。 綜上所述,漢遜酵母細(xì)胞作為重組載體或單獨(dú)的空載體均能夠誘導(dǎo)免疫細(xì)胞向脾臟聚集,促進(jìn)DCs的成熟。Yeast-HBsAg和HBsAg+yeast不但能夠在小鼠體內(nèi)誘生Th1方向的免疫應(yīng)答,而且還能夠增強(qiáng)Th2方向的免疫應(yīng)答。而alum作為HBsAg的佐劑,只能增強(qiáng)Th2方向的免疫反應(yīng),不能促進(jìn)DCs的成熟。因此,基于漢遜酵母細(xì)胞的新型乙肝表面抗原疫苗可能在乙肝的預(yù)防和治療中有很大的潛力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 段恕誠(chéng),朱啟昒,呂晴,徐華芳,顧新煥,董左權(quán);乙肝疫苗對(duì)宮內(nèi)乙肝病毒感染作用的初步研究[J];臨床兒科雜志;1993年03期

2 周紹聰;;怎樣正確使用乙肝疫苗[J];醫(yī)學(xué)文選;1991年06期

3 王春敏,李儉;乙肝疫苗的種類及其臨床應(yīng)用[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2004年04期

4 馬靜;白寶敏;萬波;楊孜;彭學(xué)鳴;張慧堅(jiān);符麗華;;母親血清及新生兒臍血HBV-DNA水平與乙肝疫苗免疫失敗的關(guān)系[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2005年12期

5 孟海鷹;;從乙肝疫苗的接種誤區(qū)談起[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2006年12期

6 嚴(yán)正平,肖健美,黃海燕;醫(yī)院工作人員乙肝病毒感染血清學(xué)檢測(cè)分析[J];江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué);2005年01期

7 張曉;;乙型肝炎疫苗注射后并非萬事大吉[J];肝博士;2007年03期

8 滕樹忠,吳永莉;提高偏遠(yuǎn)山區(qū)新生兒乙肝疫苗首針及時(shí)接種率合作項(xiàng)目策略探討[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2005年01期

9 劉安平;王寶玲;張?jiān)谔?;接種乙肝疫苗致嚴(yán)重蕁麻疹[J];藥物不良反應(yīng)雜志;2005年06期

10 謝福曉;乙肝疫苗應(yīng)用的幾個(gè)誤區(qū)[J];家庭醫(yī)學(xué);1994年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李玲;T.Tzfira;V.Citovsky;;VirF存在下VIP1-GFP和VirE2-GFP在酵母細(xì)胞表達(dá)[A];中國(guó)植物生理學(xué)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)年會(huì)暨成立40周年慶祝大會(huì)學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

2 李青華;呂文芝;蔡勝;;淺析乙肝疫苗[A];西部大開發(fā) 科教先行與可持續(xù)發(fā)展——中國(guó)科協(xié)2000年學(xué)術(shù)年會(huì)文集[C];2000年

3 張巖;張亮;周一鳴;安爽;果德安;周玉祥;曾令文;程京;;抗真菌物質(zhì)與酵母細(xì)胞作用后全基因表達(dá)譜的聚類法分析[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

4 林影;植田充美;田中渥夫;;利用蛋白ZZ將EGFP-Fc融合蛋白固定在酵母細(xì)胞表層[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

5 宋智水;楊淑萍;;不同劑量乙肝疫苗阻斷圍產(chǎn)期傳播的效果觀察[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2002年

6 陳建杰;高月求;王靈臺(tái);;乙肝病毒感染的預(yù)后影響因素[A];2002全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 楊忠華;姚善涇;;酵母細(xì)胞催化2-辛酮不對(duì)稱還原為2-辛醇的研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2003年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要集[C];2003年

8 王朝暉;陳楠;張文;任紅;陳曉農(nóng);俞海瑾;;乙肝疫苗預(yù)防接種腎小球腎炎患者療效初步觀察[A];第三屆國(guó)際中西醫(yī)結(jié)合腎病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

9 鄒小明;錢俊青;楊蘭花;匡春蘭;;酵母細(xì)胞催化拆分縮水甘油丁酸酯的工藝研究[A];首屆長(zhǎng)三角科技論壇——長(zhǎng)三角生物醫(yī)藥發(fā)展論壇論文集[C];2004年

10 李振漢;鄒中華;付雪祥;文志軍;鄧歡迎;;微卡加乙肝疫苗治療慢性乙型肝炎122例[A];第十七次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 魯鳳民　莊輝;預(yù)防乙肝病毒感染[N];北京科技報(bào);2010年

2 記者 黃瑾;將免費(fèi)接種乙肝疫苗[N];雅安日?qǐng)?bào);2009年

3 健康時(shí)報(bào)特約記者 劉慧;乙肝疫苗可能會(huì)白打[N];健康時(shí)報(bào);2009年

4 倪永華;酵母細(xì)胞之謎[N];山西經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào);2002年

5 孫國(guó)根;復(fù)旦發(fā)現(xiàn)抗乙肝病毒感染新機(jī)制[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

6 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院 李海　賈繼東;乙肝病毒感染基礎(chǔ)研究帶來的啟示[N];健康報(bào);2010年

7 孫國(guó)根;治療性乙肝疫苗已進(jìn)入三期臨床試驗(yàn)[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2008年

8 本報(bào)記者 邢佰英;天壇生物備戰(zhàn)乙肝疫苗市場(chǎng)井噴[N];中國(guó)證券報(bào);2009年

9 記者 涂端玉　通訊員 黃穗;廣州擬為15歲以下免費(fèi)補(bǔ)種乙肝疫苗[N];廣州日?qǐng)?bào);2009年

10 通訊員 嵇旭東　記者 倪秀萍 實(shí)習(xí)生 從夢(mèng)影;接種乙肝疫苗后還應(yīng)定期檢測(cè)[N];南京日?qǐng)?bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張煒;基因佐劑促進(jìn)不同乙肝疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

2 劉蓬勃;乙型肝炎疫苗接種無、弱應(yīng)答與遺傳關(guān)系的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

3 茆燦泉;金屬結(jié)合肽的噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)篩選和酵母細(xì)胞表面展示[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2001年

4 季更生;樹干畢赤酵母戊糖連續(xù)發(fā)酵及低pH值處理技術(shù)[D];南京林業(yè)大學(xué);2004年

5 楊忠華;水相中酵母細(xì)胞催化前手性羰基不對(duì)稱還原合成手性醇的研究[D];浙江大學(xué);2005年

6 孫安源;rhIL-15和rhIL-12分別促進(jìn)huPBL在NOD-SCID小鼠體內(nèi)重建及HBV疫苗的體內(nèi)免疫應(yīng)答[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2006年

7 歐志敏;微生物法還原羰基化合物制備手性藥物中間體的研究[D];浙江大學(xué);2003年

8 張旭;蛋白質(zhì)糖基化工程[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1995年

9 王克勤;國(guó)產(chǎn)FDP的產(chǎn)品研制與作用機(jī)理探討[D];華南理工大學(xué);1994年

10 林煒鐵;酵母細(xì)胞原生質(zhì)體拆合技術(shù)的研究[D];華南理工大學(xué);1991年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 韋穎華;乙肝疫苗免疫應(yīng)答水平與HLA-DRB1等位基因的相關(guān)性研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

2 王吉玲;成人乙型病毒性肝炎疫苗免疫策略研究[D];浙江大學(xué);2007年

3 王牟平;傳染性法氏囊病毒（IBDV）VP2在酵母細(xì)胞內(nèi)的高效表達(dá)及免疫原性的測(cè)定[D];延邊大學(xué);2001年

4 高原;α-乙酰乳酸脫羧酶基因工程菌株構(gòu)建及產(chǎn)酶條件優(yōu)化[D];黑龍江大學(xué);2007年

5 張儒;HBsAg基因的克隆及其在畢赤酵母和葡萄組織中的表達(dá)[D];西北大學(xué);2005年

6 蒲毅楠;釀酒酵母Pde1的細(xì)胞內(nèi)定位與定位調(diào)控機(jī)制的研究[D];天津大學(xué);2005年

7 王盛;酵母細(xì)胞不對(duì)稱催化還原制備重要他汀類手性藥物中間體的研究[D];浙江大學(xué);2006年

8 翟冰;人醛糖還原酶基因酵母表達(dá)模型的構(gòu)建及ARI抑制AR活性的初步觀察[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

9 趙東設(shè);乙肝疫苗失敗影響因素研究[D];浙江大學(xué);2008年

10 陳萍;熒光顯微技術(shù)在酵母細(xì)胞研究中的應(yīng)用[D];武漢大學(xué);2005年

，

本文編號(hào)：1417715