本文關(guān)鍵詞：TAT-HOXB4蛋白對(duì)恒河猴外周血造血干細(xì)胞動(dòng)員效果的研究　出處：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： TAT-HOXB4 CD34陽(yáng)性細(xì)胞 動(dòng)員 恒河猴

【摘要】： [目的]探討TAT-HOXB4蛋白對(duì)恒河猴外周血造血干細(xì)胞動(dòng)員(PBHSC)效果及評(píng)價(jià)該蛋白在短期內(nèi)的安全性。 [內(nèi)容]本實(shí)驗(yàn)包括四部分內(nèi)容,首先是檢測(cè)TAT-HOXB4蛋白進(jìn)入細(xì)胞的能力,為實(shí)驗(yàn)可行性提供有力支持。第二部分是檢測(cè)TAT-HOXB4蛋白對(duì)臍血CD34陽(yáng)性細(xì)胞的體外擴(kuò)增能力,為后續(xù)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)做鋪墊。第三部分是檢測(cè)TAT-HOXB4蛋白對(duì)恒河猴外周血造血干細(xì)胞(PBHSC)動(dòng)員效果并評(píng)價(jià)最佳給藥方式。第四部分是評(píng)價(jià)TAT-HOXB4蛋白安全性。 [方法]首先,利用WESTERN BLOTTING法和融合蛋白GFP法對(duì)公司提供的TAT-HOXB4蛋白進(jìn)行檢測(cè),觀察其是否具有進(jìn)入細(xì)胞的能力。該蛋白只有進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),才能有效發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。其次,用MiniMACS分離人臍帶血獲得CD34陽(yáng)性細(xì)胞,分別與未加入TAT-HOXB4蛋白的干細(xì)胞培養(yǎng)體系與加入TAT-HOXB4蛋白(將其作為作為擴(kuò)增因子)的干細(xì)胞培養(yǎng)體系共培養(yǎng),檢測(cè)TAT-HOXB4蛋白體外擴(kuò)增人CD34陽(yáng)性細(xì)胞的能力。最后,將恒河猴分為四組,分別將G-CSF、G-CSF+TAT-HOXB4、TAT-HOXB4和生理鹽水按一定劑量及相應(yīng)給藥方法對(duì)恒河猴行外周血造血干細(xì)胞動(dòng)員。檢測(cè)給藥前和給藥后的流式細(xì)胞分析(FCS)、血常規(guī)及肝腎功能,分析評(píng)價(jià)其動(dòng)員效果、最優(yōu)給藥方法及短期內(nèi)該蛋白的安全性。 [結(jié)果] TAT-HOXB4蛋白能夠非常有效進(jìn)入真核細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi),并能發(fā)揮其生物效應(yīng)。先用GFP標(biāo)記TAT-HOXB4蛋白,然后用DAPI對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色,經(jīng)共同培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)GFP標(biāo)記的HOXB4蛋白進(jìn)入到細(xì)胞核中;以WESTERN BLOTTING法檢測(cè)與TAT-HOXB4蛋白共培養(yǎng)后的細(xì)胞,可以在細(xì)胞核抽取部分檢測(cè)到TAT-HOXB4蛋白條帶存在,而未與TAT-HOXB4蛋白共同培養(yǎng)的細(xì)胞則未見(jiàn)此條帶。由上述兩實(shí)驗(yàn)可證實(shí)TAT-HOXB4具有良好的進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的能力。利用先前實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)得到TAT-HOXB4蛋白擴(kuò)增細(xì)胞的最佳濃度及最佳處理?xiàng)l件擴(kuò)增CD34陽(yáng)性細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:實(shí)驗(yàn)組CD34陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為對(duì)照組的13倍,MNC為對(duì)照組的6倍,由此我們可以證明TAT-HOXB4蛋白可在體外有效擴(kuò)增CD34陽(yáng)性細(xì)胞。經(jīng)四種給藥方式對(duì)恒河猴進(jìn)行外周血造血干細(xì)胞動(dòng)員,實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:TAT-HOXB4組CD34+陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占外周血單個(gè)核細(xì)胞數(shù)的百分比(CD34陽(yáng)性細(xì)胞率)顯著高于其它三組,TAT-HOXB4組的CD34陽(yáng)性細(xì)胞率是G-CSF組的2.21倍,是G-CSF+TAT-HOXB4組的1.63倍。在動(dòng)員期間及動(dòng)員后,恒河猴均未出現(xiàn)明顯的全身及局部不良反應(yīng),肝腎功能指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi),而且在給藥前后無(wú)明顯變化。由此以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分證明:TAT-HOXB4蛋白對(duì)恒河猴PBHSC的動(dòng)員效果非常明顯,且顯著優(yōu)于其它三個(gè)動(dòng)員組,最佳給藥方法為TAT-HOXB4組(動(dòng)員第四天注射G-CSF)。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)TAT-HOXB4蛋白在短期內(nèi)具有良好的安全性。 [結(jié)論] TAT-HOXB4蛋白能夠有效進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),并發(fā)揮其生物活性;TAT- HOXB4蛋白具有良好的體外擴(kuò)增臍血CD34陽(yáng)性細(xì)胞的活性;TAT-HOXB4對(duì)恒河猴PBHSC動(dòng)員效果顯著,且在短期內(nèi),該蛋白具有良好的安全性。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of TAT - HOXB4 protein on peripheral blood stem cell mobilization ( PBHSC ) in rhesus monkey and evaluate the safety of TAT - HOXB4 protein in the short term . The second part is to test the effect of TAT - HOXB4 protein on peripheral blood stem cell ( PBHSC ) mobilization in rhesus monkey and evaluate the best mode of administration . The fourth part is to evaluate the safety of TAT - HOXB4 protein . Methods : The TAT - HOXB4 protein ( TAT - HOXB4 ) was isolated from human umbilical cord blood by Western BLOCKING method and fusion protein GFP method . The results showed that TAT - HOXB4 protein can effectively amplify CD34 - positive cells in vitro . The results show that TAT - HOXB4 protein can effectively amplify CD34 - positive cells in vitro . The results show that TAT - HOXB4 protein can effectively amplify CD34 - positive cells in vitro . Conclusion TAT - HOXB4 protein can effectively enter the nucleus and exert its biological activity ; TAT - HOXB4 protein has a good activity of in vitro amplification of CD34 - positive cells in cord blood ; TAT - HOXB4 has a remarkable mobilization effect on PBHSC of rhesus monkey , and in the short term , the protein has good safety .

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 李晶;陳虎;;HOXB4轉(zhuǎn)錄因子在造血干細(xì)胞中表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2008年04期

2 鄭翠玲;周斌;陸敏;;HOXB4基因在造血干細(xì)胞自我更新中的調(diào)控作用[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2007年03期

3 唐宇宏;費(fèi)小明;沈文怡;繆扣榮;崔毓桂;汪承亞;;臍血CD34~+細(xì)胞體外擴(kuò)增時(shí)HOXB4基因表達(dá)的變化[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2006年01期

4 唐佩弦;造血干細(xì)胞研究發(fā)展歷史引發(fā)的思考[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2005年05期

5 唐宇宏,汪承亞;HOXB家族基因與造血干/祖細(xì)胞的功能[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2005年02期

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本文編號(hào)：1415698