本文關鍵詞：TAT-HOXB4蛋白對恒河猴外周血造血干細胞動員效果的研究　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： TAT-HOXB4 CD34陽性細胞 動員 恒河猴

【摘要】： [目的]探討TAT-HOXB4蛋白對恒河猴外周血造血干細胞動員(PBHSC)效果及評價該蛋白在短期內的安全性。 [內容]本實驗包括四部分內容,首先是檢測TAT-HOXB4蛋白進入細胞的能力,為實驗可行性提供有力支持。第二部分是檢測TAT-HOXB4蛋白對臍血CD34陽性細胞的體外擴增能力,為后續(xù)體內實驗做鋪墊。第三部分是檢測TAT-HOXB4蛋白對恒河猴外周血造血干細胞(PBHSC)動員效果并評價最佳給藥方式。第四部分是評價TAT-HOXB4蛋白安全性。 [方法]首先,利用WESTERN BLOTTING法和融合蛋白GFP法對公司提供的TAT-HOXB4蛋白進行檢測,觀察其是否具有進入細胞的能力。該蛋白只有進入細胞核內,才能有效發(fā)揮其生物學效應。其次,用MiniMACS分離人臍帶血獲得CD34陽性細胞,分別與未加入TAT-HOXB4蛋白的干細胞培養(yǎng)體系與加入TAT-HOXB4蛋白(將其作為作為擴增因子)的干細胞培養(yǎng)體系共培養(yǎng),檢測TAT-HOXB4蛋白體外擴增人CD34陽性細胞的能力。最后,將恒河猴分為四組,分別將G-CSF、G-CSF+TAT-HOXB4、TAT-HOXB4和生理鹽水按一定劑量及相應給藥方法對恒河猴行外周血造血干細胞動員。檢測給藥前和給藥后的流式細胞分析(FCS)、血常規(guī)及肝腎功能,分析評價其動員效果、最優(yōu)給藥方法及短期內該蛋白的安全性。 [結果] TAT-HOXB4蛋白能夠非常有效進入真核細胞的細胞核內,并能發(fā)揮其生物效應。先用GFP標記TAT-HOXB4蛋白,然后用DAPI對細胞核進行染色,經共同培養(yǎng)后發(fā)現GFP標記的HOXB4蛋白進入到細胞核中;以WESTERN BLOTTING法檢測與TAT-HOXB4蛋白共培養(yǎng)后的細胞,可以在細胞核抽取部分檢測到TAT-HOXB4蛋白條帶存在,而未與TAT-HOXB4蛋白共同培養(yǎng)的細胞則未見此條帶。由上述兩實驗可證實TAT-HOXB4具有良好的進入細胞內的能力。利用先前實驗室已經得到TAT-HOXB4蛋白擴增細胞的最佳濃度及最佳處理條件擴增CD34陽性細胞。實驗結果為:實驗組CD34陽性細胞數為對照組的13倍,MNC為對照組的6倍,由此我們可以證明TAT-HOXB4蛋白可在體外有效擴增CD34陽性細胞。經四種給藥方式對恒河猴進行外周血造血干細胞動員,實驗結果為:TAT-HOXB4組CD34+陽性細胞數占外周血單個核細胞數的百分比(CD34陽性細胞率)顯著高于其它三組,TAT-HOXB4組的CD34陽性細胞率是G-CSF組的2.21倍,是G-CSF+TAT-HOXB4組的1.63倍。在動員期間及動員后,恒河猴均未出現明顯的全身及局部不良反應,肝腎功能指標均在正常值范圍內,而且在給藥前后無明顯變化。由此以上實驗結果充分證明:TAT-HOXB4蛋白對恒河猴PBHSC的動員效果非常明顯,且顯著優(yōu)于其它三個動員組,最佳給藥方法為TAT-HOXB4組(動員第四天注射G-CSF)。同時我們發(fā)現TAT-HOXB4蛋白在短期內具有良好的安全性。 [結論] TAT-HOXB4蛋白能夠有效進入細胞核內,并發(fā)揮其生物活性;TAT- HOXB4蛋白具有良好的體外擴增臍血CD34陽性細胞的活性;TAT-HOXB4對恒河猴PBHSC動員效果顯著,且在短期內,該蛋白具有良好的安全性。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of TAT - HOXB4 protein on peripheral blood stem cell mobilization ( PBHSC ) in rhesus monkey and evaluate the safety of TAT - HOXB4 protein in the short term . The second part is to test the effect of TAT - HOXB4 protein on peripheral blood stem cell ( PBHSC ) mobilization in rhesus monkey and evaluate the best mode of administration . The fourth part is to evaluate the safety of TAT - HOXB4 protein . Methods : The TAT - HOXB4 protein ( TAT - HOXB4 ) was isolated from human umbilical cord blood by Western BLOCKING method and fusion protein GFP method . The results showed that TAT - HOXB4 protein can effectively amplify CD34 - positive cells in vitro . The results show that TAT - HOXB4 protein can effectively amplify CD34 - positive cells in vitro . The results show that TAT - HOXB4 protein can effectively amplify CD34 - positive cells in vitro . Conclusion TAT - HOXB4 protein can effectively enter the nucleus and exert its biological activity ; TAT - HOXB4 protein has a good activity of in vitro amplification of CD34 - positive cells in cord blood ; TAT - HOXB4 has a remarkable mobilization effect on PBHSC of rhesus monkey , and in the short term , the protein has good safety .

【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R329

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 李晶;陳虎;;HOXB4轉錄因子在造血干細胞中表達調控機制的研究進展[J];中國實驗血液學雜志;2008年04期

2 鄭翠玲;周斌;陸敏;;HOXB4基因在造血干細胞自我更新中的調控作用[J];中國實驗血液學雜志;2007年03期

3 唐宇宏;費小明;沈文怡;繆扣榮;崔毓桂;汪承亞;;臍血CD34~+細胞體外擴增時HOXB4基因表達的變化[J];中國實驗血液學雜志;2006年01期

4 唐佩弦;造血干細胞研究發(fā)展歷史引發(fā)的思考[J];中國實驗血液學雜志;2005年05期

5 唐宇宏,汪承亞;HOXB家族基因與造血干/祖細胞的功能[J];中國實驗血液學雜志;2005年02期

，

本文編號：1415698