本文關(guān)鍵詞：人呼吸道合胞病毒（HRSV）低溫傳代株穩(wěn)定性的研究　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 本研究課題目的是分析HRSV A_2株經(jīng)低溫培養(yǎng)傳代后毒力改變的情況及穩(wěn)定性檢測,為疫苗的開發(fā)做基礎(chǔ)研究。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括:HRSV在KMB_(17)上于32℃連續(xù)傳代、低溫傳代株遺傳穩(wěn)定性檢測、在不同溫度及物理?xiàng)l件下HRSV穩(wěn)定性的觀察及核酸熒光染色法觀察HRSV合胞現(xiàn)象。 HRSV在KMB_(17)上于32℃連續(xù)傳代已至35代,病毒培養(yǎng)增殖時(shí)間在7-10天左右,感染性滴度在7.0-7.5 lgCCID_(50)/ml之間,表明HRSV已慢慢適應(yīng)KMB_(17)細(xì)胞,為培養(yǎng)細(xì)胞基質(zhì)的更換(使用二倍體細(xì)胞培養(yǎng)病毒)及減毒株的篩選奠定良好基礎(chǔ)。 遺傳穩(wěn)定性觀察包括:一步生長曲線、免疫原性及核酸序列檢測。本實(shí)驗(yàn)對低溫培養(yǎng)的第5、19、28和34代做了一步生長曲線觀察,結(jié)果表明HRSV在低溫下的適應(yīng)性,即低溫傳代代次較高的病毒在32℃病變時(shí)間越來越短,感染性滴度也越來越高,至34、35代時(shí)感染性滴度已穩(wěn)定在7.5lgCCID_(50)/ml。另外,實(shí)驗(yàn)選擇經(jīng)低溫培養(yǎng)的第21和26代病毒進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn),檢測其免疫原性。結(jié)果顯示,低溫傳代的HRSV減毒程度還不夠,仍能致靶器官組織產(chǎn)生明顯炎癥及間質(zhì)性肺炎;且抗原性不強(qiáng),誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)約為1:2-1:8。最后實(shí)驗(yàn)對低溫培養(yǎng)的不同代次病毒進(jìn)行了G蛋白基因核酸序列測定,通過對低溫傳代株P(guān)15、P20、P25的序列比對,未發(fā)現(xiàn)編碼G蛋白基因發(fā)生變異。 HRSV在不同溫度保存及物理?xiàng)l件處理后穩(wěn)定性觀察,結(jié)果顯示HRSV穩(wěn)定性較差,在37℃和室溫下保存都不穩(wěn)定,感染性滴度每天分別下降1.0-2.0 lgCCID_(50)/ml和0.2-0.8 lgCCID_(50)/ml;在4℃下感染性滴度下降較慢,存放5周之后,病毒滴度變化＜0.6 lgCCID_(50)/ml,可短暫保存;-20℃保存3個(gè)月后滴度僅下降0.5 lgCCID_(50)/ml,為保證感染性滴度穩(wěn)定HRSV需保存于-20℃或更低溫度。HRSV在凍融之后,病毒感染性滴度呈明顯下降趨勢,每凍融1次,病毒感染性滴度下降約1.30 lgCCID_(50)/ml。經(jīng)超聲波處理后,HRSV病毒感染性滴度下降更快,超聲處理2次后,病毒幾乎無感染性。 鑒于HRSV穩(wěn)定性差,實(shí)驗(yàn)在病毒液中加入保護(hù)劑后觀察了滴度下降的情況。結(jié)果顯示,保護(hù)劑對病毒熱不穩(wěn)定性和凍融不穩(wěn)定性均起到穩(wěn)定作用。 核酸熒光染色法觀察HRSV在幾種細(xì)胞上的合胞體現(xiàn)象。其中Hep-2細(xì)胞是HRSV病變最快的細(xì)胞,在培養(yǎng)24h后,可看見合胞現(xiàn)象;Vero細(xì)胞病變時(shí)間次之,KMB_(17)細(xì)胞最慢,且病變形態(tài)不同于前兩者�？赡芘c病毒對細(xì)胞的敏感程度及細(xì)胞表面受體類型不同有關(guān)。
[Abstract]:The purpose of this study was to analyze the virulence and stability of HRSV Avian 2 strain after subculture at low temperature. The basic research for vaccine development. The main contents of the experiment include: 1. HRSV was subcultured at 32 鈩，

本文編號：1413308