本文關鍵詞：新型穿膜肽介導p53融合蛋白的表達及其免疫原性分析　出處：《西南大學學報(自然科學版)》2015年02期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:原核表達新型細胞穿膜肽RDP介導p53融合蛋白,并檢測其免疫原性的強弱.方法:以質(zhì)粒pET28ap53為模板擴增p53基因,并克隆至原核表達載體pET28a-RDP中,構建重組表達質(zhì)粒pET28a-RDP-p53,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Rosetta,IPTG誘導表達蛋白并純化,SDS-PAGE確定該蛋白準確性.同時,將昆明小鼠分為空白對照組(等容生理鹽水)和RDP-p53融合蛋白高、中、低劑量(4mg/kg,2mg/kg,1mg/kg)組,經(jīng)腹腔注射免疫,每隔2d給藥1次,30d后眼球取血,用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清中IgG的含量.結果:雙酶切及測序結果顯示,p53基因已克隆入表達載體中;RDP-p53融合蛋白在上清和沉淀中均獲得表達.ELISA測定結果表明,與對照組比較,低、中劑量組小鼠血清中IgG含量沒有明顯升高(p0.05),高劑量組顯著升高(p0.05).結論:成功表達并純化RDP-p53融合蛋白,其免疫原性較弱且與給藥劑量相關,為進一步研究RDP-p53融合蛋白對腦腫瘤的藥理作用奠定基礎.
[Abstract]:Objective: to express p53 fusion protein mediated by transmembrane peptide (RDP) in prokaryotic cells and to detect its immunogenicity. Methods: p53 gene was amplified by plasmid pET28ap53. The recombinant expression plasmid pET28a-RDP-p53 was constructed and transformed into Escherichia coli Rosetta. IPTG induced expression of the protein and purified SDS-PAGE to determine the accuracy of the protein. At the same time, Kunming mice were divided into blank control group (isovolumic saline) and RDP-p53 fusion protein high, medium. In the low dose group (4 mg / kg ~ 2 mg 路kg ~ (-1) mg 路kg ~ (-1)), the rats were immunized by intraperitoneal injection, and blood was taken from the eyeball every 2 days after 30 days. The IgG content in serum was determined by Elisa. Results: the results of double enzyme digestion and sequencing showed that the p53 gene had been cloned into the expression vector. The expression of RDP-p53 fusion protein in supernatant and precipitate was determined by Elisa. The results showed that the expression of RDP-p53 fusion protein was lower than that of control group. The content of IgG in serum of middle dose group was not significantly increased, while that of high dose group was significantly higher than that of high dose group. Conclusion: RDP-p53 fusion protein was successfully expressed and purified. The immunogenicity of RDP-p53 fusion protein was weak and related to the dosage of the drug, which laid a foundation for further study of the pharmacological effect of RDP-p53 fusion protein on brain tumors.
【作者單位】： 西南大學藥學院;
【基金】：國家自然科學基金(81273416) 國家大學生創(chuàng)新實驗計劃(201210635075)
【分類號】：R392
【正文快照】： p53作為重要的腫瘤抑制基因,一直備受研究者的青睞[1].當細胞DNA受到損傷時,p53蛋白可誘導細胞周期阻滯,并及時修復DNA損傷;當DNA損傷無法修復時,p53蛋白還可誘導細胞凋亡,防止細胞的惡性轉(zhuǎn)化,從而抑制腫瘤的發(fā)生[2].文獻報道野生型p53蛋白功能的缺失將會導致腫瘤的發(fā)生[3],所

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1 侯s，

本文編號：1404103