本文關(guān)鍵詞：Bcl-2在HSP70抗氧化應(yīng)激所致C2C12細(xì)胞凋亡中的作用研究　出處：《中南大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 近年研究表明,細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致心肌損傷的重要細(xì)胞機(jī)制之一,在心肌缺血/再灌注損傷、心肌梗死、心肌重塑及心力衰竭等心臟疾病或病理過程的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。熱休克蛋白(heat shockprotein,HSP)是細(xì)胞在生理狀態(tài)下必需而在應(yīng)激狀態(tài)(特別是熱應(yīng)激)時(shí)表達(dá)增多的一類細(xì)胞內(nèi)源性保護(hù)蛋白。本室以往研究證實(shí)HSP70能通過減少促凋亡蛋白Smac的釋放而顯著抑制H_2O_2誘導(dǎo)的C2C12肌源細(xì)胞凋亡。然而,HSP70影響Smac釋放和抗細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制仍不清楚。Bcl-2是最早發(fā)現(xiàn)的抗凋亡蛋白,具有穩(wěn)定線粒體膜的功能,國(guó)外研究表明Bcl-2能抑制凋亡刺激所致Smac從線粒體的釋放。但HSP70影響Smac釋放和抗細(xì)胞凋亡的作用是否與Bcl-2有關(guān),目前還不清楚。 本實(shí)驗(yàn)首先采用HSP70基因轉(zhuǎn)染及其反義寡核苷酸技術(shù),探討HSP70對(duì)Bcl-2表達(dá)的影響;再采用HSP70過表達(dá)的C2C12肌源細(xì)胞株,運(yùn)用H_2O_2處理構(gòu)建細(xì)胞凋亡模型,在Bcl-2表達(dá)上調(diào)與抑制的情況下,探討B(tài)cl-2在HSP70抗細(xì)胞凋亡中的作用,并且通過檢測(cè)Smac從線粒體釋放情況及caspase-3,9活化情況,進(jìn)一步揭示HSP70抗細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理。主要結(jié)果如下:①穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HSP70的C2C12細(xì)胞株,與轉(zhuǎn)空載體組相比,HSP70的表達(dá)較高,Bcl-2的表達(dá)也明顯升高(p＜0.01 vs pcDNA3.1);而轉(zhuǎn)染HSP70反義寡核苷酸后,與轉(zhuǎn)隨機(jī)寡核苷酸組相比,C2C12細(xì)胞內(nèi)HSP70的表達(dá)降低,Bcl-2的表達(dá)也明顯降低(p＜0.01 vs Scr-Hsp70)。②穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HSP70的C2C12細(xì)胞株,分別轉(zhuǎn)染Bcl-2反義寡核苷酸及隨機(jī)寡核苷酸后,0.5mmol/LH_2O_2處理2小時(shí),細(xì)胞成分分離后Western-blot結(jié)果顯示:在隨機(jī)寡核苷酸組,Smac主要存在線粒體中,其胞漿含量較低;而在反義寡核苷酸組,較多Smac從線粒體釋放,其胞漿含量顯著升高。③穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HSP70的C2C12細(xì)胞株,分別轉(zhuǎn)染Bcl-2反義寡核苷酸及隨機(jī)寡核苷酸后,0.5mmol/LH_2O_2處理8小時(shí),凋亡蛋白酶活性檢測(cè)顯示,在隨機(jī)寡核苷酸組細(xì)胞內(nèi)caspase-9、3活性較低,而在反義寡核苷酸組細(xì)胞內(nèi)caspase-9、3活性較高。④穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HSP70的C2C12細(xì)胞株,分別轉(zhuǎn)染Bcl-2反義寡核苷酸及隨機(jī)寡核苷酸后,0.5mmol/LH_2O_2處理24小時(shí),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示,在隨機(jī)寡核苷酸組細(xì)胞凋亡率較低,而在反義寡核苷酸組細(xì)胞凋亡率較高。 結(jié)論:①HSP70能上調(diào)Bcl-2的表達(dá)。②HSP70抑制Smac從線粒體釋放及抗細(xì)胞凋亡功能與其上調(diào)Bcl-2表達(dá)相關(guān)。
[Abstract]:Heat shock protein ( HSP ) plays an important role in the development of heart diseases such as myocardial ischemia / reperfusion injury , myocardial infarction , myocardial remodeling and heart failure . The effect of HSP70 on the expression of Bcl - 2 was discussed . The expression of HSP70 in the C2C12 cell line transfected with HSP70 was significantly lower than that in the group of antisense oligonucleotides . Conclusion : 鈶，

本文編號(hào)：1386501