發(fā)布時間：2018-01-05 07:12

  本文關鍵詞：慢性應激對大鼠空間學習記憶影響機制的研究　出處：《浙江理工大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 目的:采用孤養(yǎng)與慢性輕度不可預見性應激(CUMS)相結合建立慢性復合應激大鼠模型,通過行為學檢測、組織形態(tài)學和分子生物學相結合的方法,研究慢性應激對大鼠空間學習記憶行為和海馬、額葉腦區(qū)神經細胞粘附分子(Neural cell adhesion molecule, NCAM)及生長相關蛋白(Growth associated protein-43, GAP-43)表達的影響,以及NCAM、GAP-43表達變化與應激性行為效應之間的相互關系,以探討慢性應激對大鼠空間學習記憶影響可能的中樞機制。 方法:(1)動物模型:連續(xù)35天慢性輕度不可預見性應激結合孤養(yǎng)方法建立慢性復合應激大鼠模型。將16只雄性SD大鼠隨機分為正常對照組和應激模型組(n=8)。造模期間對照組大鼠正常飼養(yǎng),模型組給予35天的應激刺激。(2)動物行為指標:觀測實驗過程中兩組大鼠的體重變化,以Open-field法和雙瓶蔗糖水消耗實驗來評定大鼠應激后的行為變化,作為模型是否建立成功的依據。學習記憶行為指標采用Morris水迷宮和Y迷宮。(3)腦區(qū)組織形態(tài)觀察:在確認模型建立成功的基礎上處死解剖大鼠,全腦固定,切取雙側海馬、額葉腦區(qū),HE常規(guī)染色,光鏡下(x400)觀察兩組大鼠海馬各亞區(qū)及額葉腦區(qū)神經細胞形態(tài)變化,計神經細胞數(shù),并分析各腦區(qū)神經細胞數(shù)與Morris水迷宮、Y迷宮各項學習記憶行為指標間的相關性。(4)蛋白表達檢測:用免疫組織化學方法研究兩組大鼠海馬各亞區(qū)、額葉腦區(qū)中NCAM、GAP-43蛋白表達的變化,運用IPP圖像分析系統(tǒng)測定免疫反應產物的平均光密度,并分析各腦區(qū)NCAM、GAP-43蛋白表達水平與Morris水迷宮、Y迷宮各項學習記憶行為指標間的相關性。 結果: 1、慢性應激對大鼠空間學習記憶等行為的影響:模型組大鼠的體重增長量、糖水攝入量占總飲水量的百分比均明顯減少(p0.01);曠場實驗中的水平穿越格子數(shù)、站立次數(shù)均明顯減少(p0.01),中央格停留時間、糞便粒數(shù)均增加(p0.05),與對照組相比,差異具有顯著性,表明本研究慢性復合應激大鼠模型建立成功;Morris水迷宮實驗中,模型組大鼠的5天訓練平均潛伏期延長(p0.01),平臺穿越次數(shù)明顯減少(p0.01);Y迷宮實驗中,模型組大鼠第二天的主動回避反應次數(shù)明顯減少(p0.01),與對照組相比,差異均有統(tǒng)計學意義。 2、慢性應激對大鼠海馬各亞區(qū)、額葉腦區(qū)組織形態(tài)和神經細胞數(shù)的影響: 光鏡下(×400)組織形態(tài)觀察:模型組大鼠海馬CA1區(qū)錐體陽性細胞層較薄,排列稀疏紊亂,細胞胞體縮小,細胞間隙大;而對照組大鼠的海馬CA1區(qū)錐體細胞清晰完整,分布緊密規(guī)則,有明顯大量的神經纖維。模型組大鼠海馬CA3區(qū)錐體細胞排列稀疏散亂,細胞間隙增寬,細胞丟失、數(shù)量減少,細胞質染色淡;而對照組大鼠的海馬CA3區(qū)錐體細胞排列整齊,細胞質染色深。模型組大鼠海馬DG區(qū)顆粒細胞水腫,呈空泡樣變性、缺失,細胞層較薄,細胞間隙大,排列稀疏;而對照組大鼠的海馬DG區(qū)顆粒細胞清晰完整,分布面積大且密集。模型組大鼠額葉顆粒細胞核濃染,固縮,伴有膠質細胞增生聚集成堆,位于壞死的神經細胞附近;而對照組大鼠的額葉顆粒細胞形態(tài)及分布未見異常。 模型組海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)錐體細胞數(shù)均有減少(p0.05),齒狀回DG區(qū)顆粒細胞數(shù)明顯減少(p0.01),與對照組大鼠相比,差異具有顯著性;而額葉腦區(qū)顆粒細胞數(shù)組間無顯著性差異。 3、慢性應激對大鼠海馬各亞區(qū)及額葉腦區(qū)NCAM、GAP-43蛋白表達的影響:模型組大鼠海馬CA3區(qū)、DG區(qū)NCAM蛋白表達水平低,均呈陰性反應,額葉腦區(qū)NCAM免疫組化結果呈弱陽性反應,對照組均為陽性反應;測量免疫反應產物平均光密度進行半定量分析,模型組與對照組相比差異均顯著(p0.01)。 模型組大鼠海馬DG區(qū)GAP-43免疫組化結果有弱陽性反應,對照組呈強陽性反應;測量免疫反應產物平均光密度進行半定量分析,模型組與對照組相比差異具有顯著性(p0.01)。 4、兩腦區(qū)神經細胞數(shù)及NCAM、GAP-43蛋白表達量與Morris水迷宮、Y迷宮各項學習記憶行為指標之間、NCAM和GAP-43蛋白表達量之間的相關性分析:海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)、DG區(qū)細胞數(shù)與Y迷宮第二天主動回避反應次數(shù)之間均呈顯著正相關(p0.01;p0.05;p0.05),海馬DG區(qū)細胞數(shù)與Y迷宮第一天學習次數(shù)之間呈顯著負相關(p0.05);海馬CA3區(qū)及額葉腦區(qū)NCAM表達量與水迷宮5天訓練平均潛伏期之間均呈顯著負相關(p0.05),海馬CA3區(qū)NCAM表達量與Y迷宮第二天主動回避反應次數(shù)之間呈顯著正相關(p0.01);海馬DG區(qū)GAP-43表達量與水迷宮平臺穿越次數(shù)之間呈顯著正相關(p0.05)。 海馬DG區(qū)GAP-43的表達量、海馬DG區(qū)及額葉腦區(qū)NCAM的表達量與海馬CA3區(qū)NCAM的表達量均呈顯著正相關(p0.05);海馬DG區(qū)GAP-43的表達量與海馬DG區(qū)NCAM的表達量呈顯著正相關(p0.01)。 結論: 1、慢性應激損傷大鼠空間學習記憶能力,不但妨礙學習過程(空間記憶的獲得鞏固),而且影響空間記憶的提取重現(xiàn)。 2、慢性應激改變大鼠海馬及額葉神經細胞形態(tài)結構和數(shù)量,且海馬各區(qū)神經細胞數(shù)與大鼠空間學習記憶行為指標之間具有相關性,提示慢性應激損傷大鼠空間學習記憶可能與海馬及額葉腦區(qū)神經元變性凋亡或遲發(fā)性神經元死亡有關。 3、慢性應激模型大鼠海馬及額葉NCAM、GAP-43蛋白的表達均下降,兩指標之間有相關性;且兩蛋白表達水平與大鼠空間學習記憶行為指標之間亦呈強相關,推測大鼠海馬及額葉NCAM、GAP-43蛋白的表達下降可能是慢性應激損傷大鼠空間學習記憶能力的分子機制之一。
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【學位授予單位】：浙江理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R363

【引證文獻】

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1 姜碩;電針修復慢性應激致抑郁大鼠海馬星形膠質細胞損傷的機理研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2013年

相關碩士學位論文 前2條

1 王富鴻;長期不同負荷運動對大鼠學習記憶能力及海馬GAP-43基因表達的影響[D];成都體育學院;2012年

2 楊祥思;慢性應激對海馬功能和結構的不對稱影響[D];浙江理工大學;2013年

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本文編號：1382089