發(fā)布時間：2018-01-04 15:06

  本文關鍵詞：羊膜間充質(zhì)干細胞的免疫學特性研究　出處：《昆明醫(yī)學院》2009年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 間充質(zhì)干細胞 羊膜 免疫 造血干細胞移植 移植物抗宿主病

【摘要】： 目的:從羊膜中分離、培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞(MSCs),分析其免疫原性及對淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響,以期為尋找更易獲得且易于培養(yǎng)和純化的MSCs新來源及臨床提高造血干細胞移植(HSCT)成功率、減少移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生提供實驗依據(jù)。 方法:采用組織塊培養(yǎng)法從羊膜中分離、培養(yǎng)MSCs;用流式細胞術分析羊膜MSCs表面的HLA-A,B,C、HLA-DR以及T淋巴細胞活化所需共刺激分子CD80、CD86、CD40的表達;用混合淋巴細胞反應檢測羊膜MSCs刺激同種異體T淋巴細胞增殖的能力;應用CCK-8法觀察羊膜MSCs對成人外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響。 結(jié)果:羊膜MSCs具有低免疫原性,其細胞表面只表達低水平的HLA-A,B,C,不表達HLA-DR以及CD80、CD86、CD40,不會引起同種異體T淋巴細胞的增殖反應,能夠抑制成人外周血淋巴細胞的轉(zhuǎn)化,且這種抑制作用具有劑量依賴性。當羊膜MSCs與淋巴細胞的比例為1:10和1:50時均未能刺激同種異體T淋巴細胞增殖。當羊膜MSCs與淋巴細胞的比例為1:1時對淋巴細胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為88.92%;當羊膜MSCs與淋巴細胞的比例為1:2時對淋巴細胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為83.38%:當羊膜MSCs與淋巴細胞的比例為1:4時對淋巴細胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為62.10%;當羊膜MSCs與淋巴細胞的比例為1:8時對淋巴細胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為32.22%;當羊膜MSCs與淋巴細胞的比例為1:16時對淋巴細胞轉(zhuǎn)化的平均抑制率為17.35%。 結(jié)論:從羊膜中可以成功分離、培養(yǎng)出MSCs,利用其低免疫原性及對淋巴細胞的免疫調(diào)節(jié)作用,有望在誘導免疫耐受、減少和預防GVHD中發(fā)揮重要作用,提高HSCT的成功率,減少GVHD的發(fā)生。
[Abstract]:Objective: to isolate from the amniotic membrane in cultured mesenchymal stem cells (MSCs), analysis of the impact of its immunogenicity and on lymphocyte transformation, in order to find a more accessible and easy to MSCs new source and clinical training and purification of improving hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) success rate, reduce graft-versus-host disease (GVHD) to provide experimental basis.
Methods: using tissue separation, from amnion cultured MSCs; flow cytometry analysis of amniotic membrane surface of MSCs HLA-A, B, C, HLA-DR and T lymphocyte activation required costimulatory molecules CD80, CD86, CD40 expression ability; Needling proliferation of allogeneic T lymphocytes induced by MSCs detection of amniotic membrane mixed lymphocyte reaction the effects of MSCs on amniotic membrane; adult peripheral blood lymphocyte transformation by CCK-8 method.
Results: MSCs amniotic membrane has low immunogenicity, the cell surface expressed only low levels of HLA-A, B, C, HLA-DR and CD80 expression, CD86, CD40, will not cause the proliferation of allogeneic T lymphocytes, can inhibit the conversion of adult peripheral blood lymphocytes, and this inhibition is dose dependent. When the amniotic membrane MSCs and lymphocyte ratio of 1:10 and 1:50 were unable to stimulate allogeneic T lymphocyte proliferation. When the amniotic membrane MSCs and lymphocyte ratio average inhibition 1:1 on lymphocyte transformation rate was 88.92%; when the amniotic membrane MSCs and lymph cell ratio was 1:2 on average inhibition of lymphocyte transformation rate was 83.38% when: MSCs and lymphocyte ratio of amniotic membrane average inhibition 1:4 on lymphocyte transformation rate was 62.10%; when the amniotic membrane MSCs and lymphocyte ratio was 1:8 on average inhibition of lymphocyte transformation rate was 32.22%; When the proportion of MSCs and lymphocyte in amniotic membrane was 1:16, the average inhibition rate of lymphocyte transformation was 17.35%.
Conclusion: MSCs can be successfully isolated from amniotic membrane and cultured, and its low immunogenicity and immunomodulatory effect on lymphocytes are expected to play an important role in inducing immune tolerance, reducing and preventing GVHD, improving the success rate of HSCT and reducing the occurrence of GVHD.

【學位授予單位】：昆明醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R392

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