發(fā)布時間：2018-01-04 09:35

  本文關(guān)鍵詞：白色念珠菌磷脂酶與其毒力因子、耐藥性及基因多態(tài)性的關(guān)系研究　出處：《蘭州大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 背景與目的白色念珠菌的毒力因子主要包括：細(xì)胞表面粘附結(jié)構(gòu)、利于侵入的酶(天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶)、表型轉(zhuǎn)換等。宿主細(xì)胞膜中的主要成分磷脂,可被白色念珠菌分泌的磷脂酶所分解,白色念珠菌通過完整性受損的細(xì)胞膜侵入宿主細(xì)胞。目前,還不清楚磷脂酶和白色念珠菌其他毒力因子之間存在怎樣的關(guān)系,因此,本實(shí)驗(yàn)檢測臨床分離的白色念珠菌磷脂酶活性,將其分為磷脂酶高活性組和磷脂酶低活性組,探討磷脂酶與菌株其他毒力因子(溶血活性、細(xì)胞表面疏水性、粘附頰粘膜上皮細(xì)胞)、耐藥性及基因多態(tài)性之間的關(guān)系,從而對深入了解磷脂酶在白色念珠菌致病性和耐藥性中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為抗真菌藥物的研制及白色念珠菌的診斷和治療奠定理論基礎(chǔ)。 方法采用蛋黃平板法對80株白色念珠菌的磷脂酶活性進(jìn)行檢測,以PZ值表示磷脂酶活性,根據(jù)菌株P(guān)Z值,選出磷脂酶活性較高和磷脂酶活性較低的菌株各10株,分為兩組。比較兩組的溶血活性、細(xì)胞表面疏水性、粘附頰粘膜上皮細(xì)胞能力的差異,分析白色念珠菌磷脂酶與上述三種毒力因子之間的關(guān)聯(lián)性；同時進(jìn)行藥物敏感性檢測,比較兩組間耐藥性的差異；提取菌株DNA,應(yīng)用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)分析兩組的基因型特征。 結(jié)果從臨床分離的80株白色念珠菌中,78株可以分泌磷脂酶,磷脂酶陽性檢出率為97.5%,其PZ值的范圍為0.566～1.000,A組PZ均值為0.639±0.043,B組PZ均值為0.847±0.079,兩組有顯著性差異(p0.05)。兩組的溶血活性、細(xì)胞表面疏水性均無顯著性差異(p0.05),菌株磷脂酶活性與溶血活性、細(xì)胞表面疏水性均無直接關(guān)聯(lián)(r=0.122,p0.05)、(r=0.072,p0.05)。而兩組的粘附力有顯著性差異(p0.05),A組菌株對頰粘膜上皮細(xì)胞的粘附力顯著強(qiáng)于B組,磷脂酶活性與粘附力呈正相關(guān)(r=0.773,p0.01)。兩組菌株對7種抗真菌藥物的耐藥性明顯不同,A組中對益康唑耐藥率為70%,對咪康唑、氟康唑、伊曲康唑也有中敏或者耐藥情況；而B組中對益康唑耐藥率僅為10%,對其余的6種藥物均敏感。RAPD結(jié)果顯示,除B組中兩株磷脂酶陰性的菌株顯示為獨(dú)特的基因型外,剩余A、B兩組菌株主要條帶的數(shù)量和位置差異較小,在1300 bp處均顯示一高亮度條帶,在1500 bp處各顯示有3條亮帶,遺傳相似系數(shù)在0.500～1.000之間,兩組菌株基因多態(tài)性無明顯差異。 結(jié)論臨床分離的白色念珠菌多數(shù)可以產(chǎn)生磷脂酶,說明磷脂酶是白色念珠菌重要的毒力因子；其活性與菌株的粘附力有一定的相關(guān)性,但與菌株的溶血活性、細(xì)胞表面疏水性并沒有直接的相關(guān),磷脂酶活性不能直接反應(yīng)菌株其他毒力因子的情況；磷脂酶活性高的菌株其耐藥性也隨之增強(qiáng),表明磷脂酶和耐藥有一定的相關(guān)性；基因多態(tài)性不能直接反應(yīng)磷脂酶活性的強(qiáng)弱,說明基因多態(tài)性是對包括溶血活性、細(xì)胞表面疏水性、粘附力及耐藥等特征的一個綜合反映,不只簡單地反映磷脂酶這一單一的毒力特征。
[Abstract]:Background and objective virulence factors of Candida albicans include: cell adhesion structure, to invade the enzyme (aspartic proteinase, phospholipase), phenotypic conversion. The main component of host cell membrane phospholipids, can be decomposed by Candida albicans Candida albicans secreted phospholipase, through the cell membrane integrity damage of host cell invasion at present, is not clear what relationship exists between, phospholipase of Candida albicans and other virulence factors. Therefore, the detection of clinical isolates of Candida albicans phospholipase activity, which can be divided into high activity of lipase and phospholipase P group low activity group, and other virulence factors of phospholipase strain (hemolytic activity, cell surface hydrophobicity, adhesion buccal mucosa epithelial cells), the relationship between the drug resistance and the gene polymorphism, and in-depth understanding of phospholipases in pathogenicity and drug resistance in Candida albicans The effect provides an experimental basis for the development of antifungal drugs and the theoretical basis for the diagnosis and treatment of Candida albicans.
Methods using egg plate assay of phospholipase activity of 80 strains of Candida albicans, with a value of PZ indicates the phospholipase activity, according to the strains of PZ, selected high phospholipase activity and phospholipase activity in low strain all 10 strains were divided into two groups. The hemolytic activity of two groups, cell surface hydrophobicity, adhesion ability between buccal mucosal epithelial cells, analyzing the relationship between Candida phospholipase and above-mentioned three kinds of virulence factors; and drug sensitivity test, were compared between the two groups of drug resistance strain DNA; extraction, using random amplified polymorphic DNA (RAPD) technology analysis of genotype characteristics of the two groups.
The results from 80 clinical isolates of Candida albicans, 78 strains secreted phospholipase, phospholipase a positive rate of 97.5%. The PZ value range is 0.566 ~ 1 A, PZ value was 0.639 + 0.043, B + 0.079 PZ value was 0.847, there was significant difference between two groups (P0.05). The hemolytic activity the two group, there were no significant differences in cell surface hydrophobicity (P0.05) strains, and the hemolytic activity of phospholipase activity, cell surface hydrophobicity had no direct correlation (r=0.122, P0.05), (r=0.072, P0.05). There was significant difference between the two groups of adhesion, adhesion (P0.05) strains of buccal mucosa the epithelial cells of A group were significantly higher than that in group B, positive correlation of phospholipase activity and adhesion (r=0.773, P0.01). Two groups of drug resistance strains to 7 kinds of antifungal drugs were significantly different, A group of econazole drug resistance rate was 70%, fluconazole and miconazole, I Mako, also has the sensitivity of or resistance; B group To Econazole resistance rate was only 10%, were sensitive to 6 drugs for the rest of the.RAPD results showed that in B group in two strains of negative strains showed phospholipase a unique genotype, residual A, B two groups were mainly a number and position difference with smaller, at 1300 BP showed a high brightness bands at 1500 BP each showed 3 bright bands. The genetic similarity coefficient among 0.500 ~ 1, no significant difference between the two groups was gene polymorphism.
Conclusion most clinical isolates of C.albicans can produce phospholipase, phospholipase is an important virulence factor of Candida albicans; there is a certain correlation between the activity and adhesion of strains, but the hemolytic activity and strain, cell surface hydrophobicity is not directly related, phospholipase activity not a direct response to strains of other virulence factors; phospholipase activity high strain resistance also increases, indicating that there is some correlation between phospholipase and resistance; gene polymorphism is not a direct response to the intensity of phospholipase activity, indicating gene polymorphism is to include hemolytic activity, cell surface hydrophobicity, a comprehensive reflection of the adhesion and resistance characteristics, not simply reflect a single phospholipase the characteristics of virulence.

【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R379

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