本文關(guān)鍵詞：bFGF、BPE及Forskolin對(duì)體外培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞增殖的影響及量效關(guān)系的探討　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 第一部分:新生大鼠嗅球嗅鞘細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、純化與生物學(xué)特性的研究目的:探討新生2天大鼠嗅球OECs分離培養(yǎng)和純化方法,并觀察其形態(tài)學(xué)變化及免疫細(xì)胞化學(xué)特性。方法:采用原代培養(yǎng)技術(shù),從新生2天大鼠的嗅球分離培養(yǎng)OECs,用差速貼壁+化學(xué)藥物等方法純化培養(yǎng)OECs,倒置相差顯微鏡下觀察OECs形態(tài)變化特點(diǎn)及生長(zhǎng)情況,采用NGFRp75抗體行免疫細(xì)胞化學(xué)染色,根據(jù)NGFR p75免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)的OECs的純度。結(jié)果:體外培養(yǎng)的新生大鼠嗅球OECs主要為雙極或三極細(xì)胞,其突起細(xì)長(zhǎng)。未經(jīng)純化則成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)迅速7天后明顯占據(jù)優(yōu)勢(shì),而三種純化方法中差速貼壁+化學(xué)藥物+胰酶快速消化法的純化效率高于其他兩種。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,培養(yǎng)的新生大鼠嗅球OECs呈現(xiàn)NGFRp75染色陽(yáng)性。結(jié)論:差速貼壁+化學(xué)藥物+胰酶快速消化法是一種高效率的純化培養(yǎng)嗅球OECs的方法。 第二部分bFGF、BPE及Forskolin對(duì)嗅鞘細(xì)胞增殖的影響及量效關(guān)系的探討目的:探討牛垂體提取物、bFGF及Forskolin對(duì)嗅鞘細(xì)胞增殖的影響及劑量-效應(yīng)關(guān)系,為OECs移植治療SCI提供種子細(xì)胞。方法:采用原代培養(yǎng)技術(shù),從新生大鼠的嗅球分離培養(yǎng)OECs,并用差速貼壁+化學(xué)藥物+胰酶快速消化法純化培養(yǎng)OECs,添加牛垂體提取物、bFGF及Forskolin三種促增殖因子以及因子組合。MTT法檢測(cè)各組生長(zhǎng)因子以及因子組合對(duì)嗅鞘細(xì)胞生長(zhǎng)情況的影響。采用NGFRp75抗體行免疫細(xì)胞化學(xué)染色,根據(jù)NGFRp75免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)的OECs的純度,并計(jì)算OECs的增值率。結(jié)果:OECs原代培養(yǎng)并純化后添加牛垂體提取物后具有促進(jìn)OECs增殖的效應(yīng),但未見典型的劑量-效應(yīng)關(guān)系;添加bFGF后具有促進(jìn)OECs增殖的效應(yīng),且呈現(xiàn)典型的劑量-效應(yīng)關(guān)系;添加Forskolin后并不具有促進(jìn)OECs增殖的效應(yīng)。合理應(yīng)用不同濃度的bFGF與Forskolin進(jìn)行聯(lián)合刺激,能有效促進(jìn)細(xì)胞的增殖。結(jié)論:序貫的使用合適濃度的生長(zhǎng)因子組合,將是有效促進(jìn)嗅鞘細(xì)胞增殖的合理策略,有助于解決SCI治療中種子細(xì)胞來(lái)源不足這一問(wèn)題。
[Abstract]:Part I: isolation, culture, purification and biological characteristics of olfactory bulb olfactory ensheathing cells from newborn rats objective: to explore the method of isolation, culture and purification of olfactory bulb OECs from neonatal rat olfactory bulb on day 2. The morphological changes and immunocytochemical characteristics were observed. Methods: OECs was isolated from olfactory bulb of 2 days old rats by primary culture technique. OECs were purified and cultured by differential adherent chemical drugs. Morphological changes and growth of OECs were observed under inverted phase contrast microscope. NGFRp75 antibody was used for immunocytochemical staining. According to the results of NGFR p75 immunocytochemical staining, the purity of cultured OECs was analyzed. Results: the OECs of olfactory bulb of neonatal rats was mainly bipolar or tripolar cells. Without purification, fibroblasts grew rapidly for 7 days and occupied the dominant position. The purification efficiency of the three purification methods was higher than that of the other two methods. The immunocytochemical staining showed that the purification efficiency of the three methods was higher than that of the other two methods. OECs of olfactory bulb of cultured neonatal rats was positive for NGFRp75 staining. Conclusion: rapid digestion of differential adherent chemical drug trypsin is a highly efficient method for the purification of olfactory bulb OECs. The second part: the effect of BPE and Forskolin on the proliferation of olfactory ensheathing cells and its dose-response relationship objective: to study the bovine pituitary extract. The effects of bFGF and Forskolin on the proliferation of olfactory ensheathing cells and their dose-response relationship provided seed cells for OECs transplantation and treatment of SCI. Methods: primary culture technique was used. OECs were isolated from olfactory bulb of newborn rats. OECs were purified by rapid digestion of differential adherent chemical drug trypsin, and the bovine pituitary extract was added. The effects of bFGF and Forskolin on the growth of olfactory ensheathing cells were detected by bFGF and Forskolin. NGFRp75 antibody was used to detect the growth of olfactory ensheathing cells. Immunocytochemical staining was performed. According to the results of NGFRp75 immunocytochemical staining, the purity of cultured OECs was calculated. The proliferation rate of OECs was calculated. Results after primary culture and purification of OECs, adding bovine pituitary extract could promote the proliferation of OECs, but there was no typical dose-effect relationship. The addition of bFGF had the effect of promoting the proliferation of OECs, and showed a typical dose-effect relationship. The addition of Forskolin did not promote the proliferation of OECs. Different concentrations of bFGF and Forskolin were used in combination stimulation. Conclusion: it is a reasonable strategy to promote the proliferation of olfactory ensheathing cells with appropriate concentration of growth factors. It is helpful to solve the problem of insufficient source of seed cells in SCI treatment.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1375487