本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌腸毒素B編碼基因的克隆及原核表達(dá)　出處：《青島大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 金黃色葡萄球菌 腸毒素B 克隆 原核表達(dá)

【摘要】： 目的構(gòu)建金黃色葡萄球菌腸毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B,SEB)編碼基因的原核表達(dá)克隆,并在大腸桿菌中表達(dá),同時對表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性進(jìn)行研究。 方法提取產(chǎn)腸毒素B的金黃色葡萄球菌臨床分離菌株的DNA,DNAstar軟件輔助設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增出腸毒素B(SEB)成熟肽前體蛋白基因,將其插入到質(zhì)粒pGEX-4T-2編碼谷胱肽轉(zhuǎn)移酶(GST)讀碼框架下游的多克隆位點(diǎn)(MCS),構(gòu)建原核表達(dá)克隆PGEX-4T-2/SEB。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切、測序鑒定后,以TSS法轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α,用終濃度為1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá),SDS-PAGE電泳分析表達(dá)蛋白圖譜,Western blot鑒定表達(dá)蛋白。 結(jié)果經(jīng)酶切和測序分析表明,克隆獲得了金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)的編碼基因,且插入片段讀碼框架正確,無堿基錯配,pGEX-4T-2/SEB原核表達(dá)克隆構(gòu)建成功。經(jīng)IPTG誘導(dǎo),重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸桿菌表達(dá)出相對分子質(zhì)量(Mr)為58×10~((3)) Daltons的融合蛋白。Western blotting證實(shí)該蛋白能與抗SEB抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng),具有抗原活性。 結(jié)論金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)編碼基因原核表達(dá)克隆的構(gòu)建成功,并能在大腸桿菌中高效表達(dá),為進(jìn)一步研究腸毒素B(SEB)的生物學(xué)功能和臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the prokaryotic expression clone of Staphylococcus aureus enterotoxin B (Staphylococcal Enterotoxin B (SEB) encoding gene, and express it in E.coli, and study the biological activity of the expressed protein at the same time.
Method for extraction of Staphylococcus aureus enterotoxin B clinical isolates DNA, DNAstar aided design software primer PCR amplified enterotoxin B (SEB) mature peptide precursor protein gene inserted into the plasmid pGEX-4T-2 encoding glutathione transferase (GST) multiple cloning sites downstream of the reading frame (MCS). Construction of prokaryotic expression clone of PGEX-4T-2/SEB. recombinant plasmid by restriction enzyme digestion and sequencing, the TSS method into Escherichia coli DH5 alpha fusion protein expression of 1mmol/L IPTG with the final concentration of induction, analysis of protein expression of SDS-PAGE blot protein electrophoresis, the expression of Western.
The results of restriction enzyme digestion and DNA sequencing showed that the cloned staphylococcal enterotoxin B (SEB) encoding gene, and insert the correct reading frame, no base mismatch, pGEX-4T-2/SEB prokaryotic expression plasmid was constructed successfully. After IPTG induction, the recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli expression of the relative molecular mass (Mr) 58 x 10~ ((3)) Daltons fusion protein.Western blotting confirmed that the protein with anti SEB antibody specific binding reaction with antigen activity.
Conclusion the prokaryotic expression clone of Staphylococcus aureus enterotoxin B (SEB) encoding gene is successfully constructed, and can be highly expressed in E.coli, which laid the foundation for further research on the biological function and clinical application of enterotoxin B (SEB).

【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R378.11

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張波,府偉靈,湯萬里;壓電石英晶體生物傳感器應(yīng)用研究進(jìn)展[J];傳感器技術(shù);2002年05期

2 陳漢忠,蔣金書;微型電化學(xué)免疫傳感器的研制及初步應(yīng)用[J];分析化學(xué);2004年07期

3 王珂,江德臣,劉寶紅,張松,呂太平,孔繼烈;無標(biāo)記型免疫傳感器的原理及其應(yīng)用[J];分析化學(xué);2005年03期

4 祁偉,宋詩鐸,鄭東鈞;應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)檢測臨床分離的產(chǎn)TSST-1金黃色葡萄球菌[J];天津醫(yī)藥;1997年06期

5 王穎,李學(xué)義,孫瑋,張惠珍,葛海良,周光炎;超抗原SEA和SEB對正常人TCR V_β基因的限制性取用[J];上海免疫學(xué)雜志;2001年03期

6 姜永強(qiáng),鄭玉玲,寧保安,馬茹,王忠澤,李韓平;葡萄球菌中毒性休克毒素的分離純化及其體外抗肝癌活性分析[J];生命科學(xué)研究;2002年04期

7 王小紅,謝筆鈞,史賢明;金黃色葡萄球菌致病因子檢測的PCR方法[J];食品與機(jī)械;2004年03期

8 金洪傳,王青青,余海;單抗導(dǎo)向超抗原對人大腸癌細(xì)胞的抑制作用研究[J];中國腫瘤;2001年10期

9 董颯英,劉馨苗,呂鳴祥,田波義;腸毒素的生物電化學(xué)檢測[J];衛(wèi)生研究;1998年S1期

10 彭力荇,萬成松;葡萄球菌腸毒素的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2004年04期

，

本文編號：1373987