本文關(guān)鍵詞：治療性應(yīng)用于移植的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的體外擴(kuò)增及共刺激分子B7-1和B7-2對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)育和體內(nèi)穩(wěn)態(tài)影響　出處：《華中科技大學(xué)》2009年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 第一部分天然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分離及兩種體外擴(kuò)增方法的比較 【目的】平行對(duì)比分析使用抗體或骨髓分化的樹(shù)突狀細(xì)胞(bonemarrow deriveddendritic cell，BM-DC)體外擴(kuò)增天然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的的效率和擴(kuò)增質(zhì)量。 【方法】將Treg用生物素偶聯(lián)的抗體anti-CD25標(biāo)記后用一步陽(yáng)性分選法從卵清蛋白(ovalbumin，OVA)特異性TCR轉(zhuǎn)基因小鼠DO11．10外周淋巴組織分離，分別用功能性抗CD3和抗CD28抗體(anti-CD3／CD28)或加載OVA多肽的同系骨髓分化的樹(shù)突狀細(xì)胞(bone marraw derived dendritic cell，BM-DC)在高濃度外源性IL-2的輔助下刺激增殖1～4周。檢測(cè)2種方案的細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)，擴(kuò)增細(xì)胞的活性和純度，特征性細(xì)胞表型以及免疫學(xué)特性。 【結(jié)果】?jī)煞N方案均可以擴(kuò)增出純度＞90％CD4~+Foxp3~+Treg，雖然擴(kuò)增的Treg均高表達(dá)CD25和Foxp3且保持了Treg的無(wú)反應(yīng)性和特殊的細(xì)胞因子分泌譜(不分泌或低分泌IL-2和IFN-γ，高分泌IL-10)，但DC方案的擴(kuò)增效率更高，擴(kuò)增的Treg具有更好的活性和純度 【結(jié)論】同系骨髓分化的樹(shù)突狀細(xì)胞比抗CD3和抗CD28抗體對(duì)Treg具有更高的擴(kuò)增效率和擴(kuò)增質(zhì)量 第二部分?jǐn)U增調(diào)節(jié)性T細(xì)胞體內(nèi)外抑制同種異體免疫反應(yīng)能力的分析比較 【目的】平行比較2種方案擴(kuò)增的Treg在體內(nèi)和體外抑制同種異體抗原的直接提呈和間接提呈引發(fā)的免疫排斥反應(yīng)的能力。 【方法】體外功能試驗(yàn)中，將擴(kuò)增的Treg加入到模擬體內(nèi)移植物抗宿主病(graftversus host disease，GVHD)和宿主抗移植物病(host versues graft disease，HVGD)直接和間接抗原提呈的3種混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系中：①BABL/c DC／OVA+B6 CD4~+T，②B6 DC+BABL／c CD4~+T+BABL／c DC／OVA和③Ba DC／OVA／B6 Ag+B6 CD4~+T，檢測(cè)其免疫抑制活性；在體內(nèi)功能試驗(yàn)中，擴(kuò)增Treg和B6 DC過(guò)繼性輸注到預(yù)先植入OVA滲透泵的BABL／c小鼠體內(nèi)，5天后獲取淋巴細(xì)胞用B6 DC進(jìn)行繼發(fā)性刺激檢測(cè)Treg的免疫抑制活性。用流式儀檢測(cè)細(xì)胞增殖和分泌IFN-γ的效應(yīng)T細(xì)胞比例，用ELISA試劑盒檢測(cè)上清中的細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ含量。 【結(jié)果】與抗體擴(kuò)增的Treg相比，，雖然BM-DC擴(kuò)增的Treg抑制同種異體反應(yīng)性T細(xì)胞增殖的能力略弱，但卻能更有效地阻斷同種異體反應(yīng)性T細(xì)胞向分泌IFN-γ的效應(yīng)細(xì)胞分化。只有BM-DC擴(kuò)增的Treg可以在體內(nèi)存活并抑制宿主對(duì)同種異體抗原刺激的免疫反應(yīng)。 【結(jié)論】BM-DC擴(kuò)增的Treg能更適合于器官移植領(lǐng)域的治療性應(yīng)用 第三部分共刺激分子B7-1和B7-2對(duì)天然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)育和體內(nèi)穩(wěn)態(tài)影響 【目的】研究共刺激分子B7-1和B7-2對(duì)Freg在胸腺內(nèi)發(fā)育和外周內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的相對(duì)作用，為改進(jìn)阻斷CD28／B7共刺激信號(hào)通路的移植耐受方案提供參考。 【方法】用流式細(xì)胞儀對(duì)比分析野生型及B7-1或(和)B7-2敲除B6小鼠胸腺和外周淋巴組織中CD4~+CD25~+Foxp3~+T細(xì)胞的比例，并比較從野生型和B7分子敲除小鼠獲得的骨髓分化的樹(shù)突狀細(xì)胞(BM-DC)在體外維持和擴(kuò)增Treg的能力以及刺激同種異體免疫反應(yīng)的能力。 【結(jié)果】雖然B7-1或B7-2的缺失都可引起胸腺內(nèi)Treg比例下降30％，但是B7-2可維持外周85％的Treg，而B(niǎo)7-1僅能維持65％。另一方面缺乏B7-2而非B7-1提供的共刺激信號(hào)可以有效阻斷DC刺激同種異體反應(yīng)T細(xì)胞的能力。 【結(jié)論】雖然B7-2在維持調(diào)節(jié)性T細(xì)胞外周內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面發(fā)揮更重要作用，但與完全切斷CD28／B7共刺激通路相比，選擇性阻斷B7-2可以有效地抑制同種異體免疫排斥反應(yīng)同時(shí)對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響較小。
[Abstract]:Isolation of the first part of natural regulatory T cells and comparison of two methods of in vitro amplification Objective : To compare the efficiency and amplification quality of natural regulatory T cells ( Treg ) in vitro using antibody or bone marrow differentiated dendritic cells ( BM - DC ) in vitro . Methods : Treg - conjugated antibody anti - CD25 was labeled with anti - CD25 and isolated from peripheral lymphoid tissues of mouse DO11.10 with anti - CD3 and anti - CD28 antibodies or OVA - loaded dendritic cells ( BM - DC ) . The cells were stimulated to proliferate for 1 - 4 weeks with the aid of anti - CD3 and anti - CD28 antibodies or OVA - loaded dendritic cells . Both schemes can amplify the purity of CD4 ~ + Foxp3 ~ + Treg , although the amplified Treg can express CD25 and Foxp3 and maintain the non - reactive and special cytokine secretion spectrum of Treg ( secretion or low secretion of IL - 2 and IFN - 緯 , high secretion of IL - 10 ) , but the amplification efficiency of DC scheme is higher , and the amplified Treg has better activity and purity . Conclusion Compared with anti - CD3 and anti - CD28 anti - CD3 and anti - CD28 antibodies , the dendritic cells differentiated from bone marrow have higher amplification efficiency and amplification quality than anti - CD3 and anti - CD28 antibodies . Comparative analysis of the ability of the second part to amplify the ability of allogeneic immune response in vitro and outside the regulatory T cell body The purpose of this study was to compare the ability of Treg amplified by two protocols to inhibit the direct and indirect extraction of alloantigen in vivo and in vitro . In vitro function test , the amplified Treg was added to three kinds of mixed lymphocyte culture systems : 鈶

本文編號(hào)：1372655