本文關(guān)鍵詞：預(yù)測mmu-miR-30α調(diào)控糖皮質(zhì)激素受體及二者在小鼠足細(xì)胞上的表達　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 第一部分應(yīng)用生物信息學(xué)預(yù)測GR mRNA是mmu-miR-3 Oa的可能靶基因 目的：預(yù)測miRNA靶基因是否為糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid Receptor,GR)mRNA. 方法：使用miRBase(http:／／www.mirbase.org)獲得miR-30a基因序列；使用Pubmed(http:／／www.ncbi.nlm.nih.gov)獲得基因NR3C1序列；分別使用miRanda. TargetS can. PicTar生物信息學(xué)軟件對mmu-miR-30a的靶基因進行尋找與預(yù)測。 結(jié)果：miRanda.TargetS can和PicTar均預(yù)測到mmu-mir-30a的靶基因為糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid Receptor,GR)mRNA. 結(jié)論：GR mRNA是mmu-miR-30a的可能靶基因 第二部分小鼠足細(xì)胞中GRα及mmu-miR-30a的表達變化 目的：探討GRα與mmu-miR-30a在小鼠足細(xì)胞系MPC5(mouse podocyte clone 5,MPC5)中的表達變化。 方法： 條件永生型小鼠足細(xì)胞系MPC5培養(yǎng)：將復(fù)蘇MPC5細(xì)胞于33℃中增殖培養(yǎng),平均3-4天達90%以上融合傳代。換于37℃中培養(yǎng),10-14天分化為成熟,此時為分化態(tài)MPC5；將以上兩種細(xì)胞分為兩組,通過反轉(zhuǎn)錄酶—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR).免疫蛋白印跡(Western-blot).免疫熒光顯微鏡檢測Nephrin.Synaptopodin.GRα在未分化態(tài)與分化態(tài)MPC5中的表達,觀察變化；通過實時熒光定量PCR反應(yīng)(qRT-PCR)檢測mmu-miR-30 a在未分化態(tài)與分化態(tài)MPC5中的表達,觀察變化； 結(jié)果： MPC5細(xì)胞在33℃有γ-INF的1640培養(yǎng)液中生長,細(xì)胞體小而突起,細(xì)胞間排列緊密,呈鵝卵石樣,部分區(qū)域有管腔樣結(jié)構(gòu),足突樣結(jié)構(gòu)少見,平均3-4天即達到90%融合,在37℃無γ-INF條件培養(yǎng)下的足細(xì)胞較33℃的胞體透明,呈多角形,細(xì)胞間相對疏松,管腔樣結(jié)構(gòu)增多,生長速度明顯減緩,3-4天后細(xì)胞即停止增殖,1周后星型細(xì)胞樣細(xì)胞形成,樹枝狀的足突結(jié)構(gòu)明顯,可見細(xì)胞間足突互相接觸,10-14天分化成熟。RT-PCR.Western-blot.免疫熒光顯微鏡顯示,nephrin在33℃未分化足細(xì)胞和37℃分化足細(xì)胞中均有表達,37℃分化足細(xì)胞中表達顯著增加(P0.01);Synaptopodin在33℃未分化足細(xì)胞中幾乎未見表達；而在37℃分化足細(xì)胞中表達明顯(P0.01)。GRα在33℃未分化足細(xì)胞和37℃分化足細(xì)胞中均有表達,37℃分化足細(xì)胞中表達顯著增加(P0.01)：qRT-PCR檢測顯示,mmu-miR-30a在33℃未分化足細(xì)胞和37℃分化足細(xì)胞中均有表達,37℃分化足細(xì)胞中表達顯著增加(P0.01)。 結(jié)論： GRα和mmu-miR-30a在33℃未分化態(tài)和37℃分化態(tài)MPC5中均有表達,且37℃分化態(tài)MPC5表達強。
[Abstract]:The first part uses bioinformatics to predict that gr mRNA is a possible target gene of mmu-miR-3 Oa. Objective: to predict whether miRNA target gene is glucocorticoid receptor GRmRNA. Methods: the miR-30a gene sequence was obtained by using MiRBaseto http: r / r / www.mirbase.org; We use Pubmedan http: / / www.ncbi.nlm.nih.gov. to get the gene NR3C1 sequence; MiRanda. TargetS can. PicTar bioinformatics software was used to search and predict the target genes of mmu-miR-30a. Results both can and PicTar predicted that the target of mmu-mir-30a was the glucocorticoid receptor (Glucocorticoid receptor). Glucocorticoid Receptor. MRNA. Conclusion: the mmu-miR-30a target gene may be the mmu-miR-30a mRNA. The expression of gr 偽 and mmu-miR-30a in mouse podocytes Aim: to investigate the expression of gr 偽 and mmu-miR-30a in mouse podocyte cell line MPC5(mouse podocyte clone 5 (MPC5). Methods: Conditioned immortalized mouse podocyte cell line MPC5 culture: resuscitation MPC5 cells were cultured at 33 鈩，

本文編號：1371602