本文關鍵詞：RNAi抑制小鼠樹突細胞共刺激通路的體外研究　出處：《天津醫(yī)科大學》2009年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 目的:本課題應用RNAi技術修飾小鼠骨髓來源樹突細胞(Dendritic Cell,DC),敲減DC表面共刺激分子B7-1(CD80)及B7-2(CD86)表達,探討RNAi對DC表面抗原CD80、CD86表達的影響以及誘導T淋巴細胞無能的機理。 方法:采用培養(yǎng)基細胞因子選擇法體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源DC,利用已構建的針對B7-1(CD80)及B7-2(CD86)的shRNA質(zhì)粒載體pB7shRNA轉染DC,流式細胞儀檢測轉染前后DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表達情況,混合淋巴細胞培養(yǎng)觀察pB7shRNA質(zhì)粒轉染DC前后對激活異系T淋巴細胞增殖能力的影響,熒光實時定量PCR測定轉染前后CD80、CD86mRNA及混合淋巴細胞培養(yǎng)體系IL-2mRNA表達水平。使用SPSS 15.0軟件包進行數(shù)據(jù)分析。 結果:經(jīng)過體外培養(yǎng),每只小鼠可獲得1.5-2×10~7個骨髓來源DC,細胞具備典型樹突狀結構,pB7shRNA質(zhì)粒載體轉染DC后經(jīng)流式細胞儀檢測其表面抗原CD80、CD86表達變化由92.812±1.377%、70.510±1.947%分別下降至31.137±1.702%、40.511±1.555%,與對照質(zhì)粒轉染組相比有顯著差異(P＝0.000)。而MHCⅡ、CD11c表達無明顯變化。熒光實時定量PCR檢測pB7shRNA質(zhì)粒轉染小鼠骨髓源DC后,CD80、CD86mRNA表達水平下降至33.481±2.823%、37.431±2.218%,與對照質(zhì)粒轉染組相比具有顯著差異(P＝0.000)�；旌狭馨图毎囵B(yǎng)顯示,pB7shRNA干擾DC對異系T淋巴細胞的刺激指數(shù)下降,與對照質(zhì)粒轉染組相比有顯著差異(P＝0.000),反應體系中IL-2mRNA表達水平下降至25.675±1.521%,與對照質(zhì)粒轉染組相比具有顯著差異(P＝0.000)。 結論:培養(yǎng)基細胞因子選擇法可收獲大量的骨髓源DC。脂質(zhì)體介導pB7shRNA質(zhì)粒載體轉染小鼠骨髓DC可高效、特異地抑制B7-1及B7-2分子的表達,使DC激活異系T淋巴細胞能力下降,混合淋巴細胞反應體系中IL-2分泌減少,誘導T細胞無能。
[Abstract]:Objective: to modify mouse bone marrow-derived dendritic cells with RNAi technique. The expression of costimulatory molecules B7-1 (CD80) and B7-2 (CD86) on DC surface was reduced to investigate the effect of RNAi on DC surface antigen (CD80). The effect of CD86 expression and the mechanism of inducing T lymphocyte anergy. Methods: DC derived from mouse bone marrow was cultured in vitro by medium cytokine selection method. The constructed shRNA plasmid pB7shRNA for B7-1mCD80 and B7-2mCD86) was used to transfect DC. Flow cytometry was used to detect the expression of CD80, CD86, MHC 鈪，

本文編號：1365788