本文關(guān)鍵詞：二硫化碳對(duì)共培養(yǎng)大鼠睪丸支持—生精細(xì)胞凋亡和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響　出處：《華中科技大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 二硫化碳 睪丸 支持-生精細(xì)胞共培養(yǎng) 細(xì)胞凋亡 Fas系統(tǒng) P53 Bcl-2

【摘要】： 二硫化碳(CS2)是一種應(yīng)用廣泛的有機(jī)溶劑。對(duì)男(雄)性影響的報(bào)道主要表現(xiàn)為性功能由亢進(jìn)到減退,精子數(shù)減少,活動(dòng)力下降和畸形精子數(shù)增多等。但有關(guān)CS2對(duì)男(雄)性生殖損傷作用機(jī)制的研究鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以共培養(yǎng)大鼠睪丸支持-生精細(xì)胞為研究對(duì)象,初步探討CS2對(duì)大鼠睪丸細(xì)胞凋亡作用和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,為揭示其基因調(diào)控機(jī)制,闡明CS2生殖毒性的作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠睪丸支持-生精細(xì)胞共培養(yǎng)體系,運(yùn)用Feulgen氏核染色法對(duì)支持細(xì)胞和生精細(xì)胞進(jìn)行鑒定,然后以CS2作為受試物,對(duì)共培養(yǎng)大鼠支持-生精細(xì)胞進(jìn)行染毒,用MTT比色法檢測(cè)其對(duì)共培養(yǎng)細(xì)胞存活率的影響。用TUNEL法檢測(cè)支持細(xì)胞和生精細(xì)胞的凋亡指數(shù),并用Western blot方法對(duì)不同濃度CS2處理過(guò)的共培養(yǎng)細(xì)胞P53和Bcl-2蛋白進(jìn)行半定量檢測(cè),用免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)不同濃度CS2處理過(guò)的共培養(yǎng)細(xì)胞Fas和FasL蛋白進(jìn)行定位以及粗定量。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)方法建立的大鼠睪丸支持-生精細(xì)胞共培養(yǎng)體系,在不添加任何細(xì)胞因子的條件下,生精細(xì)胞能夠貼附于支持細(xì)胞層上生長(zhǎng),并在體外較長(zhǎng)時(shí)間共生。在CS2作用下,細(xì)胞相對(duì)存活率隨染毒濃度的增高而降低,當(dāng)CS2濃度≥100μmol/L時(shí),共培養(yǎng)的支持細(xì)胞與生精細(xì)胞相對(duì)存活率明顯降低(P0.05)。凋亡指數(shù)亦隨染毒濃度的增高而增大(P0.05和P0.01)。P53和Bcl-2蛋白表達(dá)水平均隨CS2染毒濃度增高而增高,各CS2濃度組P53蛋白表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組(P0.05),100μmol/L和200μmol/L濃度組Bcl-2蛋白表達(dá)水平也顯著高于對(duì)照組(P0.05)。各CS2濃度組Fas和FasL的表達(dá)量較對(duì)照組明顯增高。 從以上結(jié)果可以看出:在本實(shí)驗(yàn)建立的體外共培養(yǎng)體系中,生精細(xì)胞可以貼附與支持細(xì)胞層上生長(zhǎng),并與之較長(zhǎng)時(shí)間在體外共生,Feulgen氏核染色法用于鑒定支持細(xì)胞和生精細(xì)胞簡(jiǎn)單、易行,我們認(rèn)為這個(gè)培養(yǎng)體系和鑒定方法為深入研究化學(xué)物質(zhì)對(duì)支持細(xì)胞和生精細(xì)胞的生殖毒性及毒作用機(jī)制提供了細(xì)胞模型;CS2對(duì)體外共培養(yǎng)的支持-生精細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用,可使細(xì)胞存活率下降,細(xì)胞凋亡率增高,最終導(dǎo)致精子數(shù)量減少;CS2可誘導(dǎo)共培養(yǎng)大鼠支持-生精細(xì)胞P53、Bcl-2、Fas及FasL的表達(dá),Fas和FasL表達(dá)上調(diào),啟動(dòng)Fas系統(tǒng)使生精細(xì)胞發(fā)生凋亡,P53的表達(dá)增高進(jìn)一步促使凋亡的發(fā)生,而B(niǎo)cl-2的高表達(dá)可能是為抑制凋亡的發(fā)生而產(chǎn)生的保護(hù)性反應(yīng)。因此P53、Bcl-2和Fas系統(tǒng)參與了CS2誘導(dǎo)支持細(xì)胞和生精細(xì)胞凋亡的基因調(diào)控過(guò)程,這為進(jìn)一步探討其基因調(diào)控機(jī)制,闡明CS2致男(雄)性生殖損傷的機(jī)理,保護(hù)職業(yè)人群的健康提供了科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:Carbon disulfide (CS2) is a widely used organic solvent. The effect of CS2 on male (male) sex is mainly characterized by sexual function from hyperactivity to decline, and the number of spermatozoa decreases. However, there are few reports on the mechanism of male (male) reproductive injury caused by CS2. In this study, Sertoli and spermatogenic cells of rat testis were co-cultured. To explore the effect of CS2 on apoptosis and expression of apoptosis-related protein in rat testicular cells, and to provide scientific basis for revealing the mechanism of gene regulation and elucidating the mechanism of reproductive toxicity of CS2. In this experiment, the Sertoli cells and spermatogenic cells of rat testis were identified by Feulgen's nuclear staining method, and then CS2 was used as the test material through the establishment of rat testicular Sertoli and spermatogenic cells co-culture system. The survival rate of co-cultured rat spermatogenic cells was determined by MTT colorimetry, and the apoptosis index of Sertoli cells and spermatogenic cells was detected by TUNEL assay. The p53 and Bcl-2 proteins of co-cultured cells treated with different concentrations of CS2 were detected by Western blot. The Fas and FasL proteins of co-cultured cells treated with different concentrations of CS2 were localized and quantified by immunocytochemistry. The results showed that the spermatogenic cells could grow on the Sertoli cell layer without adding any cytokines in the co-culture system of rat testicular Sertoli cells. Under the action of CS2, the relative survival rate of cells decreased with the increase of the concentration of CS2, when the concentration of CS2 was more than 100 渭 mol/L. The relative survival rate of Sertoli cells and spermatogenic cells in co-cultured Sertoli cells was significantly lower than that in Spermatogenic cells. The apoptosis index also increased with the increase of exposure concentration (P0.05 and P0.01). The expression of p53 and Bcl-2 protein increased with the increase of CS2 concentration. The expression of p53 protein in each CS2 group was significantly higher than that in the control group (P 0.05). The expression of Bcl-2 protein in the 100 渭 mol/L and 200 渭 mol/L groups was also significantly higher than that in the control group (P0.05). The expression of Fas and FasL in each CS2 group was significantly higher than that in the control group. From the above results, we can see that in the co-culture system in vitro, spermatogenic cells can be attached to the Sertoli cell layer and grow with it for a long time in vitro symbiosis. Feulgen's nuclear staining is simple and easy to identify Sertoli cells and spermatogenic cells. We believe that this culture system and identification method provide a cell model for the further study of the reproductive toxicity and toxic mechanism of chemicals to Sertoli cells and spermatogenic cells. CS2 has cytotoxic effect on spermatogenic cells co-cultured in vitro, which can decrease the cell survival rate, increase the apoptosis rate, and eventually lead to a decrease in the number of spermatozoa. CS2 could induce the up-regulation of expression of FAS and FasL in spermatogenic cells of co-cultured rat spermatogenic cells, and induce apoptosis of spermatogenic cells by activating Fas system. The high expression of p53 may promote the occurrence of apoptosis, while the high expression of Bcl-2 may be a protective response to inhibit the occurrence of apoptosis. Bcl-2 and Fas system are involved in the gene regulation of Sertoli cell and spermatogenic cell apoptosis induced by CS2. To elucidate the mechanism of male (male) reproductive injury induced by CS2 and to provide scientific basis for the protection of occupational health.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1360922