本文關(guān)鍵詞：大鼠脾臟來源樹突狀細(xì)胞的IDO表達(dá)對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的影響　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的:研究大鼠脾臟來源的樹突狀細(xì)胞(DC)的體外分離、純化、擴(kuò)增及培養(yǎng)方法;探討不同濃度γ干擾素(IFN-γ)作用下DC內(nèi)吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)mRNA和蛋白表達(dá)的變化趨勢(shì)及IDO對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的影響。 方法:提取大鼠脾臟,采用膠原酶消化并裂解紅細(xì)胞獲得脾細(xì)胞懸液,密度梯度離心獲得單個(gè)核細(xì)胞,單次貼壁法去除淋巴細(xì)胞;采用含粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)的培養(yǎng)基誘導(dǎo)獲得DC;顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定大鼠DC特異性分子OX62和表面分子CD80、CD86的表達(dá);分別用不同濃度(0、100、300、500U/ml)的IFN-γ誘導(dǎo)作用DC后,實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定IDO mRNA的相對(duì)表達(dá)水平,Western blot檢測(cè)IDO蛋白在DC中的表達(dá)水平,并通過Quantity one圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析;并通過同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測(cè)不同濃度IFN-γ誘導(dǎo)后的DC對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的影響。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果:大鼠脾臟來源DC在體外培養(yǎng)10天的DC具有典型的樹枝狀突起, OX62表達(dá)率達(dá)到80%以上,CD80、CD86的陽性表達(dá)分別達(dá)75%、90%以上;大鼠脾臟來源DC的IDO mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量隨著IFN-γ作用濃度的增大逐漸增大,呈劑量依賴性,各組間差異有顯著性(P0.05);各組IFN-γ作用后DC與對(duì)照組比較,T淋巴細(xì)胞的增殖率顯著降低(P0.05);且隨著IFN-γ作用濃度的增大T淋巴細(xì)胞的增殖率逐漸降低,各組間差異亦具有顯著性(P0.05)。 結(jié)論:采用改良的培養(yǎng)粘附法體外成功地獲得了純度較高的大鼠脾臟來源的DC;IFN-γ可以誘導(dǎo)大鼠脾臟來源DC表面活性IDO的表達(dá)增加,減弱脾臟DC對(duì)同種T細(xì)胞增殖的刺激能力,且呈劑量依賴性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392.4

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本文編號(hào)：1353108