本文關(guān)鍵詞：腦膜炎奈瑟菌pilE、nadA等基因遺傳多態(tài)性研究　出處：《中國疾病預(yù)防控制中心》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis, Nm)是一種嚴(yán)格意義上的人類致病菌,通常無臨床癥狀地定植在人類上呼吸道粘膜,主要引起流行性腦脊髓膜炎(簡稱流腦)和敗血癥,具有很高的發(fā)病率和病死率。全球每年大約有100,000例腦膜炎奈瑟菌感染病例報道,其中致死率大約有10%。根據(jù)莢膜多糖的不同,腦膜炎奈瑟菌可分為12個血清群,其中A、B、C、W135和Y群是引起流腦流行的主要血清群。流腦的流行具有明顯的地域性特征,全球共經(jīng)歷過兩次A群流腦大流行,經(jīng)過流行血清群的轉(zhuǎn)換,歐美等國家目前主要流行血清群以B (ST-8clonal complex, ST-32clonal complex, ST-41/44clonal complex)、C (ST-11clonal complex)和Y (ST-23clonal complex)群為主；我國流腦流行以ST-5clonal complex的A群和ST-4821clonal complex的C群為主。此外,ST-11clonal complex的W135群腦膜炎奈瑟菌自2000年在麥加朝圣人群中引起暴發(fā)后,現(xiàn)已開始在全球范圍內(nèi)引起流行。 目前,有效的蛋白多糖結(jié)合疫苗已經(jīng)成功地應(yīng)用于對A、C、W135和Y群腦膜炎奈瑟菌的預(yù)防和治療。然而,由于B群腦膜炎奈瑟菌(Serogroup BMeningococcus, MenB)的莢膜多糖免疫原性較弱,且莢膜多糖的唾液酸結(jié)構(gòu)與人類神經(jīng)細(xì)胞黏附因子具有同源性,免疫接種有可能引起自身免疫,因此,MenB疫苗的研發(fā)仍是當(dāng)前科研領(lǐng)域的一個重大挑戰(zhàn)。NadA (Neisseria adhesion A)和PilE (the major pilin)作為腦膜炎奈瑟菌的主要粘附蛋白,在細(xì)菌對宿主細(xì)胞的粘附定植及侵襲過程中均起著重要作用；PorA、PorB和FetA蛋白是現(xiàn)階段B群流腦外膜囊泡疫苗(outer membrane vesicle, OMV)的主要免疫抗原成分；FHbp (factor H binding protein)蛋白是近年來通過反向疫苗學(xué)方法檢測到,而被廣泛關(guān)注的抗原蛋白成分。上述蛋白均被視為熱門的腦膜炎奈瑟菌蛋白疫苗候選成分,對它們的蛋白基因多態(tài)性進(jìn)行分析,研究其與流腦流行及變異趨勢的潛在聯(lián)系,具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。 首先我們選取我國26個省(市、自治區(qū))1963-2012年間不同血清群代表性Nm菌株230株,采用多位點序列分型(Multi—Locus Sequence Typing, MLST)、PCR、斑點雜交、基因測序等方法,檢測Nm菌株基因型特征、nadA基因分布的多態(tài)性及其基因序列特征,利用BioEdi、MEGA4.0等軟件對nadA基因序列進(jìn)行比對分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)nadA基因檢測陽性(nadA+)菌株55株,僅存在于ST-5clonal complex (cc5,序列群)的A群和ST-11clonal complex (cell)的W135群Nm菌株中,B、C及其他血清群Nm菌株nadA基因檢測均為陰性(nadA-)。 nadA+菌株基因型以variant3(V3)型為主(54/55),包括5種亞型(NadAV3.1-3.5),同源性高達(dá)99%以上。我國Nm菌株中,B群菌株不含有NadA蛋白。因此, variant3型NadA蛋白不適合作為我國B群Nm (B meningococci, MenB)蛋白疫苗的候選蛋白。 通過檢測我國144株腦膜炎奈瑟的pilE和nadA基因多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn),所有的ST-1clonal complex (cc1)和ST-5clonal complex (cc5)的A群菌株和所有的ST-11clonal complex (cc11)的W135群菌株屬于Class Ⅱ PilE;所有的C群和大部分B群(除了ST-8clonal complex和ST5642型)菌株屬于Class1PilE. Class Ⅱ pilE基因序列呈現(xiàn)出高度保守狀態(tài),而Class Ⅰ pilE基因序列具有明顯的高變區(qū),變異性較高,且該類菌株的nadA基因檢測均為陰性。nadA+菌株僅僅在Class Ⅱ PilE菌株的cc11和cc5兩個序列群中發(fā)現(xiàn)。PilE和NadA蛋白可能與流腦的局部流行或全球大流行有關(guān)。 對我國167株B群Nm菌株的MLST, porA, porB, fetA, fHbp和nadA基因進(jìn)行檢測分析發(fā)現(xiàn),cc4821已經(jīng)成為目前我國B群Nm菌株中分布的主要序列群(19.6%,32/163)。PorA在我國B群菌株中呈現(xiàn)出高度多態(tài)性特征,共檢出34種VR1型和54種VR2型,其重組型別高達(dá)83種,無顯著的優(yōu)勢型別。我國B群菌株P(guān)orB型別均屬于family3家族,并且大部分型別都與cc4821序列群有關(guān),這與國外報道的PorB型別屬于family4或15家族的研究結(jié)論截然不同。FetA型別的檢測主要為F5-5, F5-8, F5-2, F1-5和F3-3,這5種主要型別所在的菌株數(shù)量占了所有菌株數(shù)量的36.36%。fHbp在我國分布主要以variant2型為主(84.67%),其中variant2.16亞變異型所分布的菌株數(shù)量占所有檢測菌株的21.3%,且大部分屬于cc4821序列群菌株,而國外報道的fHbp主要流行型別為variant1型。nadA基因在我國絕大多數(shù)的B群菌株中是缺失的。 綜上所述,流腦流行具有明顯的地域性特征,迄今,僅ST-11clonal complex (cc11)的W135群和ST-5clonal complex (cc5)及ST-1clonal complex (cc1)的A群腦膜炎奈瑟菌可引起全球范圍內(nèi)的流腦大流行,該研究提示,不同血清群腦膜炎奈瑟菌的粘附能力可能與其潛在的流行趨勢有關(guān)；我國B群Nm具有獨特的蛋白型別。因此,我國B群流腦蛋白疫苗的研發(fā)要基于我國流行的B群Nm蛋白主要型別特征。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1352484