本文關(guān)鍵詞：Anti-hEGFR輕、重鏈共表達(dá)及高表達(dá)細(xì)胞株快速篩選　出處：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》2015年10期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：為實(shí)現(xiàn)h EGFR全長(zhǎng)抗體(anti-h EGFR)輕、重鏈共表達(dá)以及建立快速、高效篩選方法并獲得共表達(dá)細(xì)胞株。采用分子克隆技術(shù)獲得重鏈和輕鏈基因,將之連入peedual真核表達(dá)載體;經(jīng)GS-Neo加壓及流式細(xì)胞術(shù)篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株;通過protein A親和層析技術(shù)純化出目標(biāo)抗體;應(yīng)用cck-8法、Annexin V/PI法以及q PCR技術(shù)檢測(cè)anti-h EGFR對(duì)A431細(xì)胞增殖、凋亡影響。SDS-PAGE分析結(jié)果顯示,純化后抗體純度為95.0%、分子質(zhì)量約為150 ku。cck-8試驗(yàn)中不同濃度anti-h EGFR對(duì)A431細(xì)胞增殖均有極顯著抑制作用,且與商品化Cetuximab效果相近;anti-h EGFR與Cetuximab均可誘導(dǎo)A431細(xì)胞產(chǎn)生凋亡,作用效果相近,均達(dá)極顯著。全長(zhǎng)抗體輕、重鏈的共表達(dá),省去分別表達(dá)的重組過程,保證抗體天然結(jié)構(gòu);GS-Neo雙加壓結(jié)合流式篩選,實(shí)現(xiàn)陽性細(xì)胞株快速、高效分離;建立省時(shí)、高效抗體共表達(dá)平臺(tái),為抗體類藥物真核構(gòu)建及篩選提供新思路。
[Abstract]:In order to realize the light and heavy chain co expression of the full length antibody (anti-H EGFR) of H EGFR and to establish a rapid and efficient screening method, the co expression of cell lines was obtained. Get the heavy chain and light chain gene by molecular cloning technology, will be connected to the peedual eukaryotic expression vector; after GS-Neo compression and stable cell lines were obtained by flow cytometry screening; protein A affinity chromatography purified target antibody; using CCK-8 method, Annexin V/PI method and Q method for detection of PCR anti-H EGFR on the proliferation and apoptosis of A431 cells. The results of SDS-PAGE analysis showed that the purity of the purified antibody was 95% and the molecular weight was about 150 Ku. In the CCK-8 test, different concentrations of anti-H EGFR significantly inhibited the proliferation of A431 cells, and the effect was similar to that of commercialized Cetuximab. Anti-H EGFR and Cetuximab could induce A431 cells to produce apoptosis, and the effect was similar. Co expression of full-length antibody light and heavy chain, recombinant expression respectively to eliminate the process of natural structure, ensure the antibody; GS-Neo double compression combined with flow cytometry screening positive cell lines, to achieve fast and efficient separation; the establishment of time saving and efficient platform for co expression of antibodies, antibody drugs eukaryotic construction and provide new ideas for screening.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;哈藥集團(tuán)技術(shù)中心;
【基金】：國(guó)家自然基金東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)理科基地科研訓(xùn)練及科研能力提高項(xiàng)目(J1210069/J0116) 黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(GC13C104)
【分類號(hào)】：R392;Q78
【正文快照】： Co-expression of anti-h EGFR light and heavy chain and rapidscreening of cell lines/LI Deshan1,LIU Chunxiang1,JIANG Yuanyuan2,LIU Mingyao1,ZHANG Yingjie1,YUAN Qingyan1,GUO Xiaochen1,REN Guiping1,WU Qiang1,LI Tingting1(1.School of Life Sciences,Northeast

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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