本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞內(nèi)IL-1α調(diào)控沙眼衣原體誘導(dǎo)IL-8產(chǎn)生機(jī)制研究　出處：《中南大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis, Ct)是重要的性傳播疾病病原體,Ct感染可引起宮頸炎、輸卵管炎和盆腔炎,并導(dǎo)致流產(chǎn)、異位妊娠、不孕等嚴(yán)重后遺癥。Ct感染可刺激上皮細(xì)胞產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞因子,參與調(diào)節(jié)宿主的防御作用。促炎細(xì)胞因子IL-1α是機(jī)體抵抗感染的重要炎性介質(zhì),其可誘導(dǎo)自身(IL-1α)、IL-6和IL-8等炎癥因子的產(chǎn)生。目的：探討細(xì)胞內(nèi)IL-1α在沙眼衣原體早期誘導(dǎo)IL-8產(chǎn)生中的重要作用；Hax-1蛋白與IL-1α相互作用調(diào)控沙眼衣原體感染誘導(dǎo)IL-8產(chǎn)生,探討Ct感染時(shí)細(xì)胞內(nèi)IL-1α參與IL-8產(chǎn)生調(diào)控的分子機(jī)制。方法： 1.ELISA、細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)沙眼衣原體感染誘導(dǎo)的炎癥因子的產(chǎn)生和定位,復(fù)蘇已建立的單克隆穩(wěn)定細(xì)胞系,ELISA方法篩選出內(nèi)源性IL-1α沉默效果最佳的HeLa229急定細(xì)胞系。 2.構(gòu)建pro-IL-1α全長質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染穩(wěn)定細(xì)胞系,ELISA檢測(cè)外源性IL-1α對(duì)沙眼衣原體誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子1L-8產(chǎn)生的影響。 3. Western blot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Ct感染后Hax-1在HeLa229細(xì)胞中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位細(xì)胞,免疫熒光檢測(cè)Ct感染后Hax-1和IL-1α的共定位； 4.利用siRNA技術(shù)下調(diào)HeLa229細(xì)胞Hax-1的表達(dá),ELISA檢測(cè)Hax-1沉默對(duì)Ct感染后IL-8產(chǎn)生的影響。 結(jié)果： 1.Ct感染HeLa229細(xì)胞后44h可產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子IL-1α和IL-8,其中IL-1α主要表達(dá)于細(xì)胞內(nèi),IL-8則主要分泌于細(xì)胞外。 2.細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)到Ct感染后IL-1α入核,同時(shí)伴有IL-8的產(chǎn)生。 3.篩選出內(nèi)源性IL-1α沉默效果最佳的HeLa229穩(wěn)定細(xì)胞株S2C2,沉默效率約79%,Ct感染后44h,與空質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比,S2C2穩(wěn)定細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8的表達(dá)顯著降低。 4.將pro-IL-1α基因全長質(zhì)粒轉(zhuǎn)染S2C2穩(wěn)定細(xì)胞株,ELISA檢測(cè)結(jié)果證實(shí)S2C2細(xì)胞可以表達(dá)外源性pro-IL-1α,Ct感染S2C2細(xì)胞后外源性IL-1α誘導(dǎo)促炎因子IL-8的表達(dá)。 5. Western blot實(shí)驗(yàn)證明Ct感染HeLa229細(xì)胞48h, Hax-1表達(dá)顯著增高。 6.免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明Ct刺激44h時(shí)IL-1α、Hax-1有共入核現(xiàn)象,利用siRNA技術(shù)沉默Hax-1基因的表達(dá)對(duì)Ct感染誘導(dǎo)的IL-8產(chǎn)生無影響。 結(jié)論： 1.Ct感染早期誘導(dǎo)的IL-8的產(chǎn)生依賴于細(xì)胞內(nèi)IL-1α。 2.Ct感染可上調(diào)Hax-1的表達(dá),并引起IL-1α和Hax-1蛋白的共入核。 3.Hax-1基因沉默不影響IL-1α誘導(dǎo)IL-8的產(chǎn)生。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 張寧潔;張麗娜;李偉;林琳;高勁松;程文;余平;;靶向白介素-1α基因沉默的Hela229穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建[J];激光生物學(xué)報(bào);2013年05期

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本文編號(hào)：1326277