發(fā)布時間：2017-12-22 02:09

  本文關(guān)鍵詞：電刺激對維生素C誘導(dǎo)iPSCs向心肌細胞分化影響的實驗研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的探討電刺激在體外對維生素C誘導(dǎo)iPSCs向心肌細胞分化的作用。 方法1.復(fù)蘇小鼠來源的iPSCs，接種于絲裂霉素C預(yù)處理的MEF飼養(yǎng)層上，通過光學(xué)顯微鏡觀察iPSCs生長的形態(tài)變化特征，熒光顯微鏡觀察干細胞全能性基因Oct-4的表達以及堿性磷酸酶（AP）染色三個方面鑒定未分化的iPSCs。 2.采用懸滴法使iPSCs形成EBs，維生素C誘導(dǎo)其分化，按是否給予電刺激將其分為電刺激組與非電刺激組。觀察各組細胞生長情況，記錄各組擬胚體出現(xiàn)跳動的時間和跳動擬胚體的數(shù)量，計算心肌細胞分化率。共聚焦顯微鏡成像結(jié)合免疫熒光細胞化學(xué)檢測心肌特異性肌鈣蛋白（c-TnT）的表達。RT-PCR檢測Oct-4、心肌早期特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA-4和心肌特異性肌球蛋白重鏈α-MHC的基因表達。 結(jié)果1.接種于MEF飼養(yǎng)層的iPSCs呈散在分布的克隆團貼壁生長，iPSCs集落中央的細胞排列緊密，邊緣折光性強，與飼養(yǎng)層細胞界限清楚；在熒光顯微鏡下，GFP轉(zhuǎn)Oct-4基因的iPSCs細胞呈現(xiàn)綠色熒光集落（Oct-4陽性）；AP染色顯示，iPSCs克隆團著深紫色。 2.兩組在誘導(dǎo)分化過程中均出現(xiàn)自發(fā)搏動的擬胚體，電刺激組擬胚體較非電刺激組分化更快，更早出現(xiàn)自發(fā)搏動（3天vs5天），心肌細胞分化率更高[(68.89±5.09）%vs（52.22±3.85）%]，差異有顯著性，P0.05。 3.兩組搏動區(qū)域細胞均表達心肌特異性肌鈣蛋白c-TnT，電刺激組細胞c-TnT表達更清楚。 4.在誘導(dǎo)分化過程中，，Oct-4mRNA表達隨誘導(dǎo)時間延長逐漸降低，電刺激組較非電刺激組降低更快（P0.05）。兩組均檢測到心肌細胞特異性標(biāo)記分子GATA-4和α-MHC的表達。在誘導(dǎo)分化相同時間點，電刺激組GATA-4和α-MHC表達水平均高于非電刺激組（P0.05）。 結(jié)論在LIF和絲裂霉素C預(yù)處理的MEF飼養(yǎng)層環(huán)境中，iPSCs保持未分化狀態(tài)不斷增殖；模擬心臟電學(xué)微環(huán)境的電刺激在一定程度上有助于維生素C誘導(dǎo)的iPSCs在體外向具有心肌細胞表型特征的細胞分化。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

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1 楊梁;張曉剛;魏新偉;;維生素C體外誘導(dǎo)多能干細胞向心肌細胞的分化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年23期

本文編號：1318012