本文關(guān)鍵詞：萬(wàn)古霉素中介耐藥金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性及耐藥機(jī)制研究　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一種重要的人畜感染病原菌，常定植于人體皮膚和鼻腔，可引起皮膚、軟組織等的局部化膿性感染，也可引起菌血癥、腦膜炎、骨髓炎等嚴(yán)重全身性感染疾病，在醫(yī)院環(huán)境中可廣泛分布并傳播，自20世紀(jì)40年代青霉素應(yīng)用于臨床以來(lái)，該菌的感染情況曾受到較大控制，隨著青霉素的廣泛應(yīng)用，出現(xiàn)了能產(chǎn)生青霉素酶的菌株，表現(xiàn)出對(duì)青霉素的耐藥性，于是二甲氧苯基青霉素，即甲氧西林，1959年開始應(yīng)用于臨床，但是在甲氧西林應(yīng)用于臨床兩年后，在英國(guó)分離到了首例耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)，至今，MRSA感染已遍及全球，是全球院內(nèi)感染的首要致病菌，MRSA表現(xiàn)出的多重耐藥性及其對(duì)環(huán)境很強(qiáng)的適應(yīng)能力，使其感染情況尤為嚴(yán)重，與乙型肝炎、艾滋病并稱為世界范圍的三大難治感染性疾病。目前以萬(wàn)古霉素為代表的糖肽類抗生素是治療MRSA感染的最后用藥，，然而，隨著萬(wàn)古霉素在臨床上應(yīng)用的增加，出現(xiàn)了萬(wàn)古霉素敏感性降低金黃色葡萄球菌，近年來(lái)異質(zhì)性中介耐藥金黃色葡萄球菌(heterogeneous vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus，hVISA)、萬(wàn)古霉素中介的金黃色葡萄球菌(vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus，VISA)和完全耐萬(wàn)古霉素的金黃色葡萄球菌(vancomycin-resistant Staphylococcus aureus，VRSA)在國(guó)內(nèi)外時(shí)有報(bào)道，這使臨床MRSA感染的治療面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，但是金黃色葡萄球菌對(duì)萬(wàn)古霉素敏感性逐漸降低的發(fā)生機(jī)制并未被完全闡明，涉及到細(xì)菌多個(gè)方面的改變，主要有以下幾種觀點(diǎn)：(1)細(xì)胞壁增厚；(2)青霉素結(jié)合蛋白的改變；(3)自溶能力下降；(4)基因突變與轉(zhuǎn)錄水平變化；(5)耐藥基因轉(zhuǎn)移。本研究以從臨床病人分離的一株萬(wàn)古霉素中介耐藥金黃色葡萄球菌XN108為研究對(duì)象，對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究并初步探討其 耐藥發(fā)生機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： 1.細(xì)菌分離鑒定通過(guò)細(xì)菌自動(dòng)鑒定儀的鑒定、MRSA特異性基因的檢測(cè)確定XN108為MRSA菌株，并對(duì)其進(jìn)行藥敏檢測(cè)，鑒定其對(duì)各種抗生素的耐藥情況。利用肉湯稀釋法和E-test試紙條法測(cè)定XN108對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥MIC值，為12μg/ml；菌群分析實(shí)驗(yàn)分析XN108對(duì)萬(wàn)古霉素的耐藥性。 2. XN108分子分型 通過(guò)多位點(diǎn)序列分析(multilocus sequence typing，MLST)、脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsed-field gel electrophoresis，PFGE)、金黃色葡萄球菌表面蛋白A多變區(qū)分型(Xregion encoding staphylococcal protein A，spa typing)、金黃色葡萄球菌染色體盒mec元件分型(staphylococcal cassette chromosome mec typing，SCCmec typing)等基因分型的技術(shù)手段證實(shí)XN108是一株ST239-MRSA-SCCmec type III菌株, spa型別為t037。 3. XN108生物學(xué)特性研究 測(cè)定XN108菌株生長(zhǎng)曲線，結(jié)果顯示XN108的生長(zhǎng)速率較萬(wàn)古霉素敏感菌慢，約在培養(yǎng)3.5h時(shí)開始生長(zhǎng)；檢測(cè)XN108菌株溶血活性，可見XN108溶血活性下降；測(cè)定XN108菌株自溶曲線，可見相對(duì)于MSSAATCC25923，XN108的自溶能力有所下降，以上生物學(xué)特性均與VISAMu50情況相似。 4. XN108對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥機(jī)制研究 以XN108基因組DNA為模板，用特異性引物檢測(cè)萬(wàn)古霉素耐藥基因，未能檢測(cè)到；透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞壁，結(jié)果顯示XN108細(xì)胞壁相對(duì)于VSSAATCC25923，細(xì)胞壁有2倍以上增厚；qRT-PCR檢測(cè)XN108菌株細(xì)胞壁合成相關(guān)基因，結(jié)果顯示XN108在含8g/ml萬(wàn)古霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，相對(duì)于無(wú)抗生素培養(yǎng)時(shí)，pbpB基因表達(dá)上調(diào)約6倍，另外glmU、murG基因表達(dá)均有顯著升高；剛果紅敏感試驗(yàn)顯示XN108對(duì)剛果紅敏感；利用攜帶轉(zhuǎn)座子TN917的質(zhì)粒pID408構(gòu)建XN108轉(zhuǎn)座子突變文庫(kù)，并用一定濃度的萬(wàn)古霉素對(duì)突變文庫(kù)進(jìn)行篩選，篩選到能在16μg/ml VAN，24μg/mlVAN和36μg/ml VAN條件下穩(wěn)定傳代培養(yǎng)的突變株，將其命名為XN16+，XN24+和XN36+。 5. XN108及其突變株全基因組生物信息學(xué)分析 對(duì)XN108、XN16+、XN24+和XN36+進(jìn)行全基因組測(cè)序后分析，XN108的完整基因組包含一個(gè)圓形3,052,037bp的染色體，G+C含量為32.76％，有一個(gè)31,500bp的環(huán)狀質(zhì)粒，與已知的金黃色葡萄球菌的基因組序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)所測(cè)序的四株菌的基因組中的GraR調(diào)控元件區(qū)有缺失突變。這種突變可能是XN108發(fā)生萬(wàn)古霉素中介耐藥的重要原因。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R378.11

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 徐蕙;沈陽(yáng)部分地區(qū)金黃色葡萄球菌對(duì)萬(wàn)古霉素敏感性變化的機(jī)制及流行病學(xué)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號(hào)：1313334