發(fā)布時間：2017-12-19 23:00

  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌抗原HBHA在恥垢分枝桿菌中的重組表達(dá)和鑒定　出處：《華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2015年04期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 肝素結(jié)合血凝素(HBHA) 恥垢分枝桿菌 結(jié)核病 表達(dá)

【摘要】：目的構(gòu)建高效表達(dá)結(jié)核分枝桿菌抗原肝素結(jié)合血凝素(HBHA)的重組恥垢分枝桿菌。方法針對結(jié)核分枝桿菌H37Rv株HBHA的編碼基因Rv0475設(shè)計特異引物,利用PCR技術(shù)從細(xì)菌基因組中獲取目的基因,并克隆入pET-30b(+)載體構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pETHBHA,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)pETHBHA轉(zhuǎn)化的重組E.coli BL21(DE3)細(xì)菌,Ni柱純化攜帶C-端His標(biāo)簽的HBHA蛋白,并制備鼠源多克隆抗體。PCR擴(kuò)增含自身啟動子和調(diào)節(jié)序列的Rv0475基因并克隆入大腸埃希菌-分枝桿菌穿梭載體pMV261,構(gòu)建重組分枝桿菌表達(dá)質(zhì)粒pMVHBHA,并經(jīng)酶切鑒定證實(shí)后,電轉(zhuǎn)化入恥垢分枝桿菌,涂布含卡那霉素的7H11平板,挑選抗性克隆并擴(kuò)大培養(yǎng),15%SDS-PAGE和Western blot鑒定重組恥垢分枝桿菌的表達(dá)。結(jié)果分別成功構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pETHBHA和重組分枝桿菌表達(dá)質(zhì)粒pMVHBHA;重組蛋白HBHA在大腸埃希菌中成功表達(dá)并純化后,BCA蛋白濃度測定試劑盒測定濃度為1.912 5μg/μL,用其制備鼠源多抗;證實(shí)HBHA利用其自身的啟動子和調(diào)節(jié)序列在重組恥垢分枝桿菌中表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建過表達(dá)HBHA的重組恥垢分枝桿菌,為研究該蛋白參與結(jié)核病的致病機(jī)制和研發(fā)新型疫苗和診斷試劑奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院第一臨床學(xué)院;華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【基金】：華中科技大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計劃項(xiàng)目(No.教育部高教司函[2014]24號)
【分類號】：R378.911
【正文快照】： 結(jié)核病(tuberculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染所引起的、嚴(yán)重危害人類健康的傳染病之一�？ń槊�(M.bovisBCG)是預(yù)防TB的唯一疫苗,但對成人結(jié)核缺乏預(yù)防能力。肝素結(jié)合血凝素(HBHA)是M.tb的重要毒力因子[1],其甲基化部分具有重要的免疫學(xué)特

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 江鷹;趙善民;師長宏;;HBHA在結(jié)核病研究中的應(yīng)用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年17期

2 江莉莎;鄔亭亭;劉平;郭述良;;分枝桿菌噬菌體Leo的生物學(xué)和基因組學(xué)特征[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 周珊;徐修禮;馬越云;劉家云;程曉東;張倩;郝曉柯;;HBHA截短體蛋白的表達(dá)純化及其診斷活性研究[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2014年24期

2 李恒德;左建宏;王麓山;;結(jié)核分枝桿菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年11期

3 姚義勇;江莉莎;張莉;郭述良;柳巖;;分枝桿菌噬菌體Guo1環(huán)狀基因組特征及生物學(xué)特性分析[J];微生物學(xué)通報;2015年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 葛淑敏;非結(jié)核分枝桿菌的鑒定及胞內(nèi)分枝桿菌HBHA表達(dá)和實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 喬亞紅;抗原誘發(fā)的γ-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核性胸膜炎診斷中的應(yīng)用研究[D];鄭州大學(xué);2013年

2 陳詩濤;牛布魯氏菌和牛分枝桿菌抗原的基因克隆、表達(dá)和抗原性鑒定[D];暨南大學(xué);2013年

3 馬駿;結(jié)核桿菌對不同人工關(guān)節(jié)假體材料黏附能力的實(shí)驗(yàn)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

4 繆海鋒;T-SPOT試驗(yàn)在臨床結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值研究[D];浙江大學(xué);2013年

5 李娜娜;IFN-γ釋放試驗(yàn)的臨床應(yīng)用及相關(guān)細(xì)胞因子在結(jié)核分枝桿菌感染中表達(dá)的研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2014年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 彭麗;陳保文;羅永艾;沈小兵;黎友倫;蘇城;王國治;;噬菌體D29對耐藥結(jié)核病豚鼠的治療作用[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年17期

2 甘易玲;劉平;鄔亭亭;郭述良;;分枝桿菌噬菌體DNAⅢ的遺傳學(xué)信息及抗結(jié)核潛力初步研究[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年10期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐苗,陳保文,沈小兵,蘇城,羅永艾,王國治;恥垢分枝桿菌作為免疫調(diào)節(jié)劑的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年09期

2 湛W歐，

本文編號：1309746