發(fā)布時間：2017-12-18 14:11

  本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)抗原胰島素樣生長因子2mRNA結(jié)合蛋白3多克隆抗體的制備和鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建胰島素樣生長因子2mRNA結(jié)合蛋白3(IGF2BP3)的原核表達載體,在大腸桿菌中表達并純化IGF2BP3-His融合蛋白,制備和鑒定小鼠抗人IGF2BP3多克隆抗體。方法用PCR方法擴增IGF2BP3基因,構(gòu)建到pET-28a原核表達載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),誘導IGF2BP3蛋白的表達。所獲得的蛋白經(jīng)鎳柱親和層析純化,并用透析方法脫去尿素使蛋白復性,獲得IGF2BP3原核表達蛋白。將制備的原核表達蛋白免疫BALB/c小鼠,制備多克隆抗體,再用ELISA、Western blot法、免疫組織化學法對抗體的反應性及特異性進行鑒定。結(jié)果成功克隆出IGF2BP3基因,經(jīng)測序與GenBank公布的序列一致;PCR酶切鑒定證實成功構(gòu)建了pET-28a-IGF2BP3原核表達載體;質(zhì)粒在BL21(DE3)中成功表達出相對分子質(zhì)量(Mr)為70000左右的融合蛋白,純化后經(jīng)SDS-PAGE分析純度在90%以上。ELISA確定抗體效價在1∶50000以上,且Western blot法和免疫組織化學技術(shù)均證實多克隆抗體能特異性識別目的蛋白。結(jié)論成功制備了特異性的小鼠抗人IGF2BP3的多克隆抗體。
【作者單位】： 中日友好醫(yī)院檢驗科;梅奧醫(yī)學中心生物化學與分子生物學系;北京大學醫(yī)學部基礎(chǔ)醫(yī)學院免疫學系T細胞實驗室;解放軍第302醫(yī)院肝衰竭診療與研究中心;解放軍第306醫(yī)院心胸外科;
【基金】：國家自然科學基金青年基金(81301495) 中日友好醫(yī)院青年英才計劃(2014-QNYC-B-12) 國家科技支撐計劃課題(2012BAH24F05)
【分類號】：R392
【正文快照】： 胰島素樣生長因子2 mRNA結(jié)合蛋白3(insulin likegrowth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3),定位于染色體7p11.5。開放讀框(open reading frame,ORF)全長1740 bp,編碼579氨基酸。其編碼的蛋白含有4個K同源結(jié)構(gòu)域(K homologous domain,KH結(jié)構(gòu)域)和2個RNA識別基序(RNA re

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本文編號：1304449