本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)抗原胰島素樣生長因子2mRNA結(jié)合蛋白3多克隆抗體的制備和鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建胰島素樣生長因子2mRNA結(jié)合蛋白3(IGF2BP3)的原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中表達(dá)并純化IGF2BP3-His融合蛋白,制備和鑒定小鼠抗人IGF2BP3多克隆抗體。方法用PCR方法擴(kuò)增IGF2BP3基因,構(gòu)建到pET-28a原核表達(dá)載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),誘導(dǎo)IGF2BP3蛋白的表達(dá)。所獲得的蛋白經(jīng)鎳柱親和層析純化,并用透析方法脫去尿素使蛋白復(fù)性,獲得IGF2BP3原核表達(dá)蛋白。將制備的原核表達(dá)蛋白免疫BALB/c小鼠,制備多克隆抗體,再用ELISA、Western blot法、免疫組織化學(xué)法對抗體的反應(yīng)性及特異性進(jìn)行鑒定。結(jié)果成功克隆出IGF2BP3基因,經(jīng)測序與GenBank公布的序列一致;PCR酶切鑒定證實成功構(gòu)建了pET-28a-IGF2BP3原核表達(dá)載體;質(zhì)粒在BL21(DE3)中成功表達(dá)出相對分子質(zhì)量(Mr)為70000左右的融合蛋白,純化后經(jīng)SDS-PAGE分析純度在90%以上。ELISA確定抗體效價在1∶50000以上,且Western blot法和免疫組織化學(xué)技術(shù)均證實多克隆抗體能特異性識別目的蛋白。結(jié)論成功制備了特異性的小鼠抗人IGF2BP3的多克隆抗體。
【作者單位】： 中日友好醫(yī)院檢驗科;梅奧醫(yī)學(xué)中心生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系T細(xì)胞實驗室;解放軍第302醫(yī)院肝衰竭診療與研究中心;解放軍第306醫(yī)院心胸外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金(81301495) 中日友好醫(yī)院青年英才計劃(2014-QNYC-B-12) 國家科技支撐計劃課題(2012BAH24F05)
【分類號】：R392
【正文快照】： 胰島素樣生長因子2 mRNA結(jié)合蛋白3(insulin likegrowth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3),定位于染色體7p11.5。開放讀框(open reading frame,ORF)全長1740 bp,編碼579氨基酸。其編碼的蛋白含有4個K同源結(jié)構(gòu)域(K homologous domain,KH結(jié)構(gòu)域)和2個RNA識別基序(RNA re

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 呂丹;錢曉萍;田曉軍;張毓;張君;;人UNC5CL原核蛋白的表達(dá)及多克隆抗體的制備和鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年03期

2 林黎娟;張錦輝;王研;鄭琳琳;林貞花;蔡英蘭;;胰島素樣生長因子2mRNA結(jié)合蛋白3在肺鱗癌的表達(dá)及預(yù)后分析[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年07期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃新立;高園園;丁軍;王學(xué)浩;;原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌組織中IMP3表達(dá)與臨床特點和基因甲基化相關(guān)性的研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年05期

2 胡帥;俞悅;高云;呂凌;李國強(qiáng);;IMP3與IGF2在乙肝相關(guān)性肝癌組織中表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年05期

3 聶佳;章麗霞;劉鈞;;胰島素樣生長因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白—3(IMP3)在婦科腫瘤中的應(yīng)用[J];川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2014年06期

4 張冉;王全義;張軍臣;于珊珊;王海濤;敖啟林;;IMP3蛋白及Ki-67在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義[J];濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年01期

5 吳倩;李群;;子宮內(nèi)膜透明細(xì)胞癌的診治進(jìn)展[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2014年08期

6 宋慧娟;李宏丹;魏嘉;蘇榮健;;人GRP78蛋白的原核表達(dá)、純化及抗原活性鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年10期

7 高園園;張峰;;IMP3在原發(fā)性消化系統(tǒng)腫瘤中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年17期

8 楊擁軍;張秀琳;譚慶民;;IMP3在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義[J];中國實用醫(yī)藥;2014年03期

9 劉紀(jì)昀;易韋;于燕妮;張著學(xué);吳倩;文安智;;IMP3、P16在宮頸上皮內(nèi)瘤變及浸潤性癌中的表達(dá)及意義[J];中國婦幼保健;2014年11期

10 吳倩;易韋;張著學(xué);劉紀(jì)昀;文安智;林永順;;IMP3及P16在宮頸癌篩查脫落細(xì)胞塊中的表達(dá)和意義[J];中國婦幼保健;2014年26期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 顧偉亭;CDK8和SREBP1在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2013年

2 孫向潔;IMP3在肺腺癌中的表達(dá)與臨床預(yù)后的相關(guān)性研究及初步機(jī)制探討[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

3 王湛博;ERG在肝臟原發(fā)梭形細(xì)胞惡性腫瘤中的表達(dá)及意義[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

4 蘇鵬;IMP3在乳腺癌上皮間葉轉(zhuǎn)化及多藥耐藥中的研究[D];山東大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 劉卓雅;CRMP-2和IMP-3在肺癌中的表達(dá)及意義[D];華中科技大學(xué);2013年

2 吳倩;子宮內(nèi)膜透明細(xì)胞癌的診治進(jìn)展[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

3 李文君;IMP3、RFP、HER-2蛋白在Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

4 許希中;IMP3，，HIF-1α和TWIST在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義[D];蘇州大學(xué);2013年

5 Sujita Shrestha;P16、P53和IMP3在宮頸癌前病變和宮頸癌中的表達(dá)和意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

6 劉俊鋒;IMP3與CD44v6在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2014年

7 李冰熠;IMP1在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及其意義[D];鄭州大學(xué);2014年

8 鄧知之;IMP3、IGF-Ⅱ在宮頸癌中的表達(dá)及意義[D];中南大學(xué);2014年

9 胡帥;IMP3聯(lián)合CD44s預(yù)測肝癌肝切除患者預(yù)后的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 林黎娟;金政;林貞花;王研;蔡英蘭;;肝細(xì)胞癌組織中IMP3蛋白的表達(dá)及意義[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2012年01期

2 李康華;黃躍平;張俊;李國軍;李思鴻;;IMP3蛋白在骨肉瘤組織中的表達(dá)與臨床意義[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2009年05期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 唐潔;孫平;章曉聯(lián);;人CD59基因克隆、原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2009年10期

2 吳玉;蔡媛媛;徐霞;林云恩;;人Ⅱ型高爾基體膜蛋白73多克隆抗體的制備及免疫學(xué)鑒定[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年02期

3 張娜;錢琨;朱明月;高愛俊;邵紅霞;金文杰;秦愛建;;雞源性高遷移率族蛋白B1多克隆抗體的制備及應(yīng)用[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2014年03期

4 靳曉紅;盧圣新;劉元東;郗日末;蘇靜靜;;食品中殘留抗生素多克隆抗體的制備[J];中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期

5 蘇莉;刁振宇;胡婭莉;張艷青;王志群;;富含半胱氨酸蛋白61多克隆抗體的制備及其在子癇前期胎盤檢測中的作用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年10期

6 安薇;徐霞;;人脂聯(lián)素球狀結(jié)構(gòu)域基因的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[J];中國免疫學(xué)雜志;2011年09期

7 秦偉;毛朝明;王勝軍;吳蔚;牟笑;許化溪;包丹霞;;人UL16結(jié)合蛋白3的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年05期

8 王春苗;賈天軍;;豚鼠衣原體GPIC0474多克隆抗體制備[J];河北北方學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版);2012年03期

9 賀貞;林東子;李觀強(qiáng);馬衛(wèi)列;丁航;張志珍;;H5N1亞型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗體的制備及鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年16期

10 薛一;孫靜;劉夢蘭;黃瓊;杜新麗;張日華;劉云;;S100A16基因的原核表達(dá)和多克隆抗體制備[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2012年10期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孟慶玲;才學(xué)鵬;喬軍;景志忠;張艷;田廣孚;郭愛疆;;中國白兔白介素-10基因的克隆、表達(dá)及其多克隆抗體的制備[A];中國實驗動物學(xué)會第七屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

2 俞娟;伍欣星;;重組BLCAP多克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第八屆第十七次學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

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本文編號：1304449