本文關(guān)鍵詞：靶向血管生成素-2基因短發(fā)夾RNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡影響的觀察

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【摘要】：目的構(gòu)建人血管生成素-2(Ang-2)短發(fā)夾RNA(shRNA)真核表達(dá)質(zhì)粒,觀察其在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)狀態(tài)下對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)增殖和凋亡的影響,探討Ang-2基因在ERS狀態(tài)下介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用和機(jī)制。方法采用DNA重組技術(shù)根據(jù)人Ang-2mRNA序列設(shè)計(jì)并合成2條shRNA寡核苷酸片段,構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒并通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染HUVECs,對(duì)Ang-2基因進(jìn)行RNA沉默,采用RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)Ang-2在ERS狀態(tài)下mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定證實(shí),2個(gè)shRNA表達(dá)載體均構(gòu)建成功。與空白對(duì)照、陰性對(duì)照組相比,Ang2-1-shRNA、Ang2-2-shRNA組HUVECs中Ang-2基因mRNA及蛋白表達(dá)水平均降低,其中,Ang2-1-shRNA干擾效果最強(qiáng)。Ang-2mRNA和蛋白的抑制率分別達(dá)79.29%、68.21%。沉默Ang-2基因可增加ERS狀態(tài)下HUVECs細(xì)胞活力及抑制其凋亡。結(jié)論成功構(gòu)建靶向Ang-2基因的shRNA真核表達(dá)載體,Ang-2基因沉默對(duì)ERS狀態(tài)下HUVECs凋亡有抑制作用。Ang-2基因可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖,增強(qiáng)ERS狀態(tài)下HUVECs凋亡。
【作者單位】： 云南省第一人民醫(yī)院急診科;云南省第一人民醫(yī)院遺傳診斷中心;中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所;昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【基金】：云南省教育廳科學(xué)研究基金項(xiàng)目(2014CO12Y)
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 血管生成素-2(Ang-2)與糖尿病血管病變密切相關(guān),可使炎癥介質(zhì)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)表達(dá)增加[1-3]。關(guān)于Ang-2在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)介導(dǎo)下對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷及炎癥信號(hào)通路分子機(jī)制方面的研究較少。本研究通過(guò)構(gòu)建靶向人Ang-2基因短發(fā)夾RNA(shRNA)表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)

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本文編號(hào)：1292715