發(fā)布時間：2017-12-11 17:14

  本文關鍵詞：利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)建立Prmt1敲除的小鼠胚胎干細胞系

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【摘要】：目的利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)構(gòu)建Prmt1敲除的E14小鼠胚胎干細胞系,并分析驗證其敲除效果。方法利用第3代基因編輯技術(shù)CRISPR-Cas9系統(tǒng),針對Prmt1第4、5、6、7外顯子設計4條gRNAs,gRNA兩兩組合轉(zhuǎn)染E14細胞,特異性的敲除E14細胞中的Prmt1,并在蛋白質(zhì)水平,mRNA水平和基因組水平分別驗證敲除效果。結(jié)果與對照組相比,兩組敲除實驗組都檢測不到Prmt1蛋白質(zhì)和mRNA的表達,基因組測序結(jié)果分析顯示,兩實驗組中Prmt1的mRNA均出現(xiàn)無義突變,使其mRNA的翻譯異常終止。同時,實時定量PCR結(jié)果顯示,精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族其他成員Prmt2,Carm1和Prmt6 mRNA表達不受影響。結(jié)論成功獲得特異性敲除Prmt1的E14細胞系,為研究Prmt1在胚胎干細胞中的作用提供了重要工具。
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所/北京協(xié)和醫(yī)學院基礎學院生物化學與分子生物學系;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(90919048) 國家教育部博士點基金資助項目(20111106110024)
【分類號】：R321
【正文快照】： 基因編輯技術(shù),是指對DNA的核苷酸進行插入、置換和刪除等操作,從而特異性的去改寫DNA圖譜的技術(shù)�；蚓庉嫾夹g(shù)是基因功能研究的重要手段,也是遺傳學和分子生物學的重要研究方向。Zinc-Finger Nucleases(ZFNs)和Transcription Activator-Like Effector Nucleases(TALENs)是基

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本文編號：1279266