發(fā)布時間：2017-12-06 16:26

  本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體4在成骨細胞共培養(yǎng)體系中對干細胞向破骨細胞分化的影響及機制

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【摘要】：目的:探索Toll樣受體(Toll like receptor,TLR)-4在成骨細胞共培養(yǎng)體系中對干細胞向破骨細胞分化的影響及機制。方法:Percoll密度梯度離心法分離原代大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),流式細胞術(shù)鑒定細胞表面標志物CD34、CD44、CD54、CD90。用Transwell小室建立干細胞(上室)-成骨細胞(下室)共培養(yǎng)體系,在此體系下對BMSCs進行破骨細胞誘導培養(yǎng)。將共培養(yǎng)體系分為TLR-4激活組和空白組,前者以TLR-4激動劑LPS(10 ng/m L)激活,后者加入等體積PBS。在誘導培養(yǎng)第6天,對上室細胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色,計數(shù)并比較各組破骨細胞數(shù)。同時,蛋白質(zhì)印跡檢測各組下室細胞懸液中核因子κB受體活化因子配體(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)的蛋白表達,觀察電泳條帶并行定量分析。結(jié)果:密度離心法獲得原代大鼠BMSCs,流式細胞分析檢測顯示CD34陰性、CD44、CD54和CD90陽性。TRAP染色陽性細胞為破骨細胞,細胞計數(shù)顯示,TLR-4激活組破骨細胞數(shù)明顯多于空白組(t=13.556,P0.05)。蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示,TLR-4激活組RANKL的表達明顯多于空白組(t=17.630,P0.05)。結(jié)論:在成骨細胞共培養(yǎng)體系下,激活TLR-4能夠促進BMSCs向破骨細胞分化,其機制可能與TLR-4促進成骨細胞分泌RANKL有關(guān)。
【作者單位】： 江蘇大學附屬醫(yī)院骨科;華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院骨科;
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 干細胞定向分化的調(diào)節(jié)是近年來的研究熱點之一,許多信號分子參與其中,Toll樣受體(Toll likereceptor,TLR)就是其中之一。TLR不僅能調(diào)節(jié)干細胞的增殖[1],還能調(diào)節(jié)干細胞向成骨方向的分化[2]。我們前期實驗結(jié)果表明,TLR-4作為干細胞表面主要的TLR亞型之一,在大鼠骨髓間充質(zhì)干細

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本文編號：1259233