本文關(guān)鍵詞：人尿源干細(xì)胞用于組織工程構(gòu)建的可行性研究

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【摘要】：目的通過對(duì)尿源干細(xì)胞與尿源誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞進(jìn)行多向誘導(dǎo)分化比較,并利用誘導(dǎo)后的平滑肌樣細(xì)胞進(jìn)行復(fù)層細(xì)胞膜片構(gòu)建,探討兩種干細(xì)胞用于組織工程構(gòu)建的可行性。 方法將尿源干細(xì)胞分別向平滑肌、內(nèi)皮、神經(jīng)細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化,通過實(shí)時(shí)定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)、細(xì)胞免疫熒光染色鑒定多向誘導(dǎo)后的特異性mRNA及蛋白表達(dá)情況。將誘導(dǎo)后的平滑肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)移入溫度敏感型培養(yǎng)皿(Nunc Upcell)中,通過降低溫度獲得單層細(xì)胞膜片,并將單層細(xì)胞膜片進(jìn)行多次疊加,來獲得復(fù)層平滑肌細(xì)胞膜片。同時(shí)對(duì)前期實(shí)驗(yàn)獲得的尿源誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞進(jìn)行多向誘導(dǎo)分化,并進(jìn)行qRT-PCR、細(xì)胞免疫熒光染色鑒定多向誘導(dǎo)后的特異性mRNA及蛋白表達(dá)情況。對(duì)兩種細(xì)胞的誘導(dǎo)效果進(jìn)行比較,探討其用于組織工程構(gòu)建的可行性。 結(jié)果(1)尿源干細(xì)胞向平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞方向誘導(dǎo)的14天過程中,Oct4、 Sox2、Nanog等多潛能基因的相對(duì)表達(dá)量下降,而平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物的表達(dá)明顯增多。(2)尿源干細(xì)胞在向神經(jīng)細(xì)胞方向誘導(dǎo)14天后,除Nestin基因表達(dá)增高,其它基因表達(dá)及細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化。(3)誘導(dǎo)后的平滑肌樣細(xì)胞結(jié)合溫度敏感型培養(yǎng)皿可獲得復(fù)層平滑肌細(xì)胞膜片。(4)尿源誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞在平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞方向誘導(dǎo)效果均優(yōu)于尿源干細(xì)胞,而神經(jīng)細(xì)胞方向誘導(dǎo)后可形成神經(jīng)祖細(xì)胞特有的“玫瑰花環(huán)”樣結(jié)構(gòu),在神經(jīng)細(xì)胞特異性基因的表達(dá)明顯增高的同時(shí),Sox2基因表達(dá)也維持在較高水平。 結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)尿源干細(xì)胞向平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞方向誘導(dǎo)效果較好,而神經(jīng)細(xì)胞方向誘導(dǎo)效果欠佳。結(jié)合溫度敏感型培養(yǎng)皿可獲得誘導(dǎo)后平滑肌復(fù)層細(xì)胞膜片。尿源干細(xì)胞與誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞分別向平滑肌、內(nèi)皮和神經(jīng)細(xì)胞方向進(jìn)行誘導(dǎo)分化比較后發(fā)現(xiàn),誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞具有多向分化潛能,相比尿源干細(xì)胞分化能力更好,在組織工程方面具有更好的應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 Ching-Shwun Lin;;Advances in stem cell therapy for the lower urinary tract[J];World Journal of Stem Cells;2010年01期

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本文編號(hào)：1256989