本文關(guān)鍵詞：凝血酶—富血小板血漿復(fù)合物影響體外培養(yǎng)的人軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：通過(guò)在體外培養(yǎng)的人軟骨細(xì)胞時(shí)，加入不同濃度的凝血酶-富血小板血漿(PRP)復(fù)合物，檢測(cè)人軟骨細(xì)胞增殖數(shù)量，軟骨細(xì)胞RNA合成總量以及合成II型膠原量的變化，，探索凝血酶-富血小板血漿(PRP)促進(jìn)體外培養(yǎng)的人軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。 方法： 1.人軟骨細(xì)胞培養(yǎng)，并傳代至第3代。 2.制備人富血小板血漿。 3.按如下濃度制備凝血酶-富血小板血漿(PRP)復(fù)合物。每20ul富血小板血漿中含凝血酶2.2ul，凝血酶濃度分別為10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50Uu/ml、60U/ml、70U/ml、80U/ml、90U/ml、100U/ml、200U/ml、500U/ml和1000U/ml。 4.取第三代軟骨細(xì)胞，按1×104個(gè)接種于96孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞貼壁并同步化后分組，每5孔為一組。陰性對(duì)照組：只含DMEM培養(yǎng)液；陽(yáng)性對(duì)照組：DMEM培養(yǎng)液+PRP；實(shí)驗(yàn)組：DMEM培養(yǎng)液+PRP+不同濃度凝血酶)；實(shí)驗(yàn)組分為：10U/ml組、20U/ml組、30U/ml組、40U/ml組、50U/ml組、60U/ml組、70U/ml組、80U/ml組、90U/ml組、100U/ml組、200U/ml組、500U/ml組、1000U/ml組,在培養(yǎng)1天后用cck-8（細(xì)胞增殖）法檢測(cè)各組OD值，根據(jù)OD值對(duì)應(yīng)的凝血酶濃度得出本實(shí)驗(yàn)最適凝血酶濃度，然后與常規(guī)使用的凝血酶濃度1000U/ml通過(guò)PCR擴(kuò)增, PCR反應(yīng)產(chǎn)物分析等方法對(duì)軟骨細(xì)胞分泌II型膠原蛋白基因表達(dá)的比較。結(jié)果采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析。以了解不同凝血酶濃度對(duì)體外培養(yǎng)的人軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 結(jié)果： 1.人軟骨細(xì)胞培養(yǎng)，原代細(xì)胞一般24-72小時(shí)貼壁，8-10天形成單層細(xì)胞。傳代培養(yǎng)至第3代，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛。 2. OD值：①陰性對(duì)照組(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)與陽(yáng)對(duì)照組(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），②實(shí)驗(yàn)組(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)與陰性對(duì)照組(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），③實(shí)驗(yàn)組(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)與陽(yáng)性對(duì)照組(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。④實(shí)驗(yàn)組內(nèi)，凝血酶為10U/ml、20U/ml及80U/ml-1000U/ml與60U/ml比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），60U/ml促增殖作用高于10U/ml、20U/ml及80U/ml-1000U/ml，30U/ml-50U/ml及70U/ml與60U/ml比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但從10U/ml-60U/ml促軟骨細(xì)胞增殖作用逐級(jí)上升并呈濃度依賴關(guān)系。從70U/ml組開始促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖作用減弱，80U/ml-1000U/ml之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 3.軟骨細(xì)胞合成分泌二型膠原蛋白結(jié)果：根據(jù)PCR灰度值，凝血酶60U/ml的軟骨細(xì)胞分泌II型膠原蛋白基因表達(dá)高于凝血酶1000U/ml（P0.05）。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在體外培養(yǎng)的人軟骨細(xì)胞中，加入凝血酶-富血小板血漿復(fù)合物能促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖,在實(shí)驗(yàn)中隨著凝血酶濃度增高其促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖作用反而減弱，低濃度凝血酶促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖更好，其中又以60U/ml為最適濃度。
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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本文編號(hào)：1255084