本文關(guān)鍵詞：自噬在慢性砷誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的作用

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【摘要】：目的： 長期暴露于砷污染中時可以誘導(dǎo)多種腫瘤的發(fā)生。皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal Transition）是腫瘤發(fā)生的一個重要步驟，自噬是細(xì)胞用來對抗自身轉(zhuǎn)化的自我保護(hù)機(jī)制，本文旨在探討人支氣管上皮細(xì)胞BEAS-2B經(jīng)慢性亞砷酸鈉誘導(dǎo)后，自噬在BEAS-2B轉(zhuǎn)化中的作用。 方法： 1. BEAS-2B細(xì)胞處理 用2.5ummol/L亞砷酸鈉誘導(dǎo)48h為急性砷誘導(dǎo)；用0.25ummol/L亞砷酸鈉誘導(dǎo)66天為慢性砷誘導(dǎo)；對照組BEAS-2B相同條件無亞砷酸鈉培養(yǎng)66天；Beclin-1shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BEAS-2B細(xì)胞抑制自噬；10nM雷帕霉素作用BEAS-2B細(xì)胞24h增強(qiáng)自噬；10nM巴弗洛霉素A1作用BEAS-2B細(xì)胞24h抑制自噬。 2.集落形成實驗 經(jīng)0.25uM亞砷酸鈉暴露培養(yǎng)66天的BEAS-2B細(xì)胞，進(jìn)行軟瓊脂集落形成實驗，14天后顯微鏡下觀察克隆形成情況，挑取細(xì)胞克隆消化培養(yǎng)為轉(zhuǎn)化細(xì)胞。 3.自噬檢測 Western Blot檢測各組自噬標(biāo)志蛋白Beclin-1，LC3Ⅱ，P62，觀察自噬的活性；細(xì)胞經(jīng)單丹磺酰戊二胺染色（MDC）染色,熒光顯微鏡觀察自噬小體綠色熒光信號。 4.上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）標(biāo)志物和炎性體相關(guān)蛋白檢測 調(diào)節(jié)自噬，Western Blot檢測上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白E-cadherin、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白Vimentin、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC表達(dá)。 結(jié)果： 1. BEAS-2B細(xì)胞經(jīng)慢性亞砷酸鈉暴露66天，，克隆形成率為22.77%，較對照組（3.06%）具有顯著差異（p0.01）； 2.慢性砷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化的BEAS-2B細(xì)胞，形態(tài)由上皮細(xì)胞的不規(guī)則多邊形變?yōu)樗笮危怀晒⒏鹘M細(xì)胞，獲得pDNA-Beclin1shRNA質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。 3.急性砷誘導(dǎo)組beclin-1蛋白、LC3Ⅱ蛋白的表達(dá)最高，慢性砷誘導(dǎo)組beclin-1蛋白、LC3Ⅱ蛋白的表達(dá)較前者下降，但仍然高于對照組；而這兩組細(xì)胞自噬降解蛋白P62的表達(dá)低于對照組。 4.與對照組相比，急性砷誘導(dǎo)組和慢性砷誘導(dǎo)組MDC染色顯示較強(qiáng)的綠色熒光信號，其中急性砷誘導(dǎo)組熒光信號最強(qiáng)。 5.以雷帕霉素促進(jìn)自噬，上皮標(biāo)志蛋白E-cadherin表達(dá)增多，而間質(zhì)標(biāo)志蛋白vimentin表達(dá)下降；而以巴弗洛霉素A1抑制自噬后，結(jié)果正相反。 6. IL-1β成熟體與凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC的表達(dá)隨著雷帕霉素促進(jìn)自噬而下降，隨著巴弗洛霉素A1抑制自噬而升高。 結(jié)論： 1.慢性亞砷酸鈉誘導(dǎo)的BEAS-2B細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，克隆形成能力增強(qiáng)，細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化； 2.亞砷酸鈉誘導(dǎo)人肺支氣管上皮細(xì)胞促進(jìn)自噬， 3.自噬對ASC與IL-1β具有負(fù)調(diào)節(jié)作用，自噬對細(xì)胞轉(zhuǎn)化進(jìn)程起負(fù)調(diào)節(jié)作用；
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 余思;何曉順;馬毅;胡安斌;巫林偉;朱曉峰;;雷帕霉素轉(zhuǎn)換在肝移植術(shù)后腎功能不全患者中的應(yīng)用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年11期

2 張可華;宋建國;;EMT與腫瘤[J];生命的化學(xué);2008年05期

本文編號：1245900