本文關(guān)鍵詞：人ATG4B的表達(dá)及蛋白純化和鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建含His標(biāo)簽的自噬相關(guān)蛋白4同源物B(ATG4B)重組質(zhì)粒以得到His-ATG4B蛋白,初步鑒定其生物學(xué)活性。方法利用PCR技術(shù)從人乳腺文庫(kù)中擴(kuò)增出ATG4B基因的編碼序列,插入p ET-28a(+)載體中得到重組質(zhì)粒,經(jīng)酶切鑒定后轉(zhuǎn)化Rossate菌,挑選小量誘導(dǎo)出的His-ATG4B菌液進(jìn)行His-ATG4B蛋白的純化,SDS-PAGE和Western blot法檢測(cè)His-ATG4B蛋白的純化效果,GST pull-down技術(shù)對(duì)蛋白生物學(xué)功能進(jìn)行鑒定。結(jié)果用PCR技術(shù)從人乳腺文庫(kù)中擴(kuò)增得到大小約1100 bp的目的片段,插入p ET-28a(+)載體中構(gòu)建出His-ATG4B重組質(zhì)粒,酶切鑒定及測(cè)序結(jié)果均表明His-ATG4B質(zhì)粒構(gòu)建成功;轉(zhuǎn)化Rossate菌并小量誘導(dǎo),表達(dá)鑒定成功后純化蛋白,得到相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約為47 000的His-ATG4B蛋白,且SDS-PAGE檢測(cè)蛋白純化效果較好;GST pull-down實(shí)驗(yàn)證實(shí)His-ATG4B蛋白可以和LC3B蛋白在體外相互作用,生物學(xué)活性良好。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功得到His-ATG4B蛋白,為研究ATG4B在自噬中的作用機(jī)制奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院;總參警衛(wèi)局衛(wèi)生保健處;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31100604) 院創(chuàng)新基金(ZHYX003)
【分類號(hào)】：R3411
【正文快照】： 自噬相關(guān)蛋白4同源物B(autophagy-relatedprotein 4 homolog B,ATG4)是一種半胱氨酸蛋白酶,在細(xì)胞發(fā)生自噬的過(guò)程中,通過(guò)剪切和去脂作用調(diào)節(jié)ATG8蛋白的脂化修飾[1]。研究發(fā)現(xiàn),在酵母細(xì)胞中至少有19種自噬相關(guān)基因(autophagy-related gene,ATG)參與了自噬小體的形成[2],其中ATG

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 范忠義;徐小潔;曹佳;康磊;韓白玉;蔣凱;葉棋濃;杜楠;;人GST-Cdc25C融合蛋白的原核表達(dá)、純化及功能初步檢測(cè)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙金匣;王志平;陶燕;賀振華;郭琦;洪梅;;攜帶FLAG標(biāo)簽的人BTG2真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年06期

2 朱紅裕;李強(qiáng);;外源蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)策略[J];過(guò)程工程學(xué)報(bào);2006年01期

3 古亞楠;趙永亮;王丹;陳靜;;轉(zhuǎn)基因植物研究中目標(biāo)蛋白鑒定方法研究進(jìn)展[J];河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年06期

4 徐明;嚴(yán)曉文;楊利民;王秋泉;;化學(xué)標(biāo)記與蛋白質(zhì)/多肽的識(shí)別檢測(cè)[J];中國(guó)科學(xué):化學(xué);2011年04期

5 張平平;張劍韻;黃龍全;;家蠶吡哆醛激酶的融合表達(dá)與純化[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2010年09期

6 王婭寧;李淑娟;;融合標(biāo)簽技術(shù)及其應(yīng)用[J];科技經(jīng)濟(jì)市場(chǎng);2009年06期

7 鄒少林;丁先鋒;郭江峰;;重組FLAG標(biāo)簽的融合表達(dá)純化及親和常數(shù)的測(cè)定[J];科技通報(bào);2010年03期

8 黃茜;黃璐;潘道東;楊瑤;;植物乳桿菌Lactobacillu plantarumY1菌株膽鹽水解酶基因(bsh)的克隆及重組表達(dá)[J];南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年03期

9 聶春明;寧曉彥;張宇宏;樊曉虎;趙國(guó)芬;張偉;;應(yīng)用融合標(biāo)簽技術(shù)提高乳糖酶在畢赤酵母中的分泌表達(dá)[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào);2012年05期

10 黃豫曉;劉學(xué)武;沈燕;李英輝;梁嬌;王軍;劉忠湘;趙亞;徐志凱;;PbTIP多克隆抗體對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)生長(zhǎng)抑制作用的初步研究[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2013年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 孫銘飛;覃宗華;謝明權(quán);呂敏娜;于勁術(shù);吳彩艷;蔡建平;;柔嫩艾美爾球蟲(chóng)Ⅱ型丙二酰單酰輔酶A：ACP轉(zhuǎn)移酶(EtMAT)不同表達(dá)載體的構(gòu)建及其優(yōu)化表達(dá)策略[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐立新;MeJA對(duì)人參DS基因表達(dá)的影響及DS在酵母中的表達(dá)[D];吉林大學(xué);2011年

2 呂大偉;抗RANKL單克隆抗體在大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中的應(yīng)用及RANKL轉(zhuǎn)錄調(diào)控的探索性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

3 楊柳青;蛇根木阿嗎靈生物合成途徑中三個(gè)重要酶的表達(dá)，純化，結(jié)晶，，三維結(jié)構(gòu)表征及催化機(jī)理研究[D];浙江大學(xué);2011年

4 李嘉堯;紅螯光殼螯蝦親蝦脂類營(yíng)養(yǎng)需求及脂肪酸結(jié)合蛋白的功能研究[D];華東師范大學(xué);2011年

5 趙健;AGR2基因促肝癌轉(zhuǎn)移的研究和HDGF相互作用蛋白的鑒定[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

6 盧艷;日本血吸蟲(chóng)診斷抗原的篩選、鑒定及初步評(píng)價(jià)[D];華東理工大學(xué);2012年

7 李雅楠;芽孢桿菌β-甘露聚糖酶新基因的快速篩選、克隆及表達(dá)研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

8 張君;乙型肝炎病毒包膜蛋白受體的分離及其識(shí)別位點(diǎn)的鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

9 柯濤;α-淀粉酶的分子定向進(jìn)化及其突變體結(jié)構(gòu)與功能研究[D];華中科技大學(xué);2006年

10 梁晶丹;變鉛青鏈霉菌DNA磷硫�；揎椞卣骷皺C(jī)理的研究[D];上海交通大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 亓振國(guó);分子伴侶表達(dá)載體構(gòu)建及TEV蛋白酶突變體的功能分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 耿計(jì)偉;乳腺癌特異性轉(zhuǎn)導(dǎo)多肽介導(dǎo)的HSV-tk/GCV抗瘤系統(tǒng)的構(gòu)建及其體外靶向效應(yīng)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

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本文編號(hào)：1243262