本文關(guān)鍵詞：酶消化法分離培養(yǎng)原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞及免疫組化鑒定

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【摘要】：目的建立體外膠原酶消化法分離培養(yǎng)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)及免疫鑒定的方法。方法采用I型膠原酶對(duì)PASMCs進(jìn)行體外培養(yǎng)。在無菌環(huán)境下,分離提取雄性Sprague Dawley(SD)大鼠肺動(dòng)脈主干,剝離外膜、剔除內(nèi)皮細(xì)胞,經(jīng)酶消化法,體外培養(yǎng)PASMCs。倒置相差顯微鏡觀察PASMCs生長(zhǎng)狀態(tài)及特點(diǎn);臺(tái)盼蘭測(cè)定細(xì)胞活力;免疫細(xì)胞染色法進(jìn)行平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(α-SM actin)鑒定。結(jié)果酶消化法分離培養(yǎng)的PASMCs 3 d后,可見細(xì)胞貼壁呈梭形生長(zhǎng),6 d后生長(zhǎng)迅速呈典型的峰-谷狀生長(zhǎng),9 d后達(dá)90%融合。通過形態(tài)學(xué)觀察及免疫熒光染色法鑒定表明:培養(yǎng)的細(xì)胞為PASMCs;細(xì)胞存活率為98.5%;原代培養(yǎng)8~10 d后即可傳代,3-10代細(xì)胞生長(zhǎng)迅速、細(xì)胞形態(tài)不易發(fā)生改變,可用于進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。結(jié)論采用I型膠原酶消化法簡(jiǎn)單易行、可靠、PASMCs生長(zhǎng)迅速、傳代周期短的特點(diǎn);尤為重要的是,培養(yǎng)的原代PASMCs可用于肺動(dòng)脈高壓和肺血管重構(gòu)的研究工作。
【作者單位】： 南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院應(yīng)用解剖研究所;南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科;
【基金】：湖南省教育廳科研項(xiàng)目(13C837) 湖南省科技廳項(xiàng)目(2014FJ3016)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)是以肺血管阻力的增加和肺動(dòng)脈壓力持續(xù)增高為特征的進(jìn)展性疾病,肺血管重構(gòu)作為PAH的重要病理特征,對(duì)其機(jī)理進(jìn)行深入研究有助于進(jìn)一步闡述PAH的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制[1-3]。研究表明,肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary artery smooth musc

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 侯樂偉;廖明芳;翁劍鋒;楊琳;鄒思力;景在平;;α-平滑肌肌動(dòng)蛋白在人胸主動(dòng)脈夾層中的表達(dá)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年01期

2 辛毅;龔達(dá);習(xí)昕;石洪濤;劉颯;許秀芳;李娜;黃益民;;酶聯(lián)合消化法和貼塊法分離小鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞及其生物學(xué)特性的研究[J];中國(guó)生物工程雜志;2013年09期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 辛毅;龔達(dá);習(xí)昕;石洪濤;劉颯;許秀芳;李娜;黃益民;;酶聯(lián)合消化法和貼塊法分離小鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞及其生物學(xué)特性的研究[J];中國(guó)生物工程雜志;2013年09期

2 廖運(yùn)學(xué);王昌明;蔣明;馬禮兵;徐青;陳峰;呂倩;;大鼠遠(yuǎn)端肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)及其生物學(xué)特性和功能的研究[J];中國(guó)全科醫(yī)學(xué);2014年27期

3 辛毅;劉颯;許秀芳;李溫斌;黃益民;羅毅;周玉杰;;成年小鼠心成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及生物學(xué)特性[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年11期

4 彭文;周湘鴻;柴湘平;周勝華;;主動(dòng)脈夾層生物學(xué)診斷指標(biāo)的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年02期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李斌;NOTCH-1在主動(dòng)脈瓣二葉畸形合并升主動(dòng)脈擴(kuò)張發(fā)生中的作用機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 章_┝，

本文編號(hào)：1241702