本文關(guān)鍵詞：腫瘤壞死因子-α作用下椎間盤退變動物模型的建立

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【摘要】：背景：腰椎間盤突出癥是骨科的常見病癥之一，以腰腿痛為主要臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。炎性因子在椎間盤退行性變中起到重要作用，有研究報道在退變的椎間盤組織中發(fā)現(xiàn)TNF-α異常表達(dá)。 目的：制作腫瘤壞死因子-α(TNF-α)作用下兔椎間盤退變（IVDD）的動物模型，研究TNF-α對髓核組織的影響。 方法：成年健康新西蘭大白兔30只，體重：2.5-3.0Kg，經(jīng)右后外側(cè)入路暴露（L2-3、L3-4、L4-5和L5-6）四個椎間隙,椎間盤分組處理：L3/4、L4/5為作為實驗組，每個椎間盤髓核使用微量注射器注射20ng/ul TNF-α15ul；L5/6作為對照組，每個椎間盤髓核使用微量注射器注射15ul PBS；L2/3作為空白組，不做處理。分別于術(shù)后4周、8周、12周隨機(jī)抽取10只新西蘭大白兔行X線及磁共振（MR）檢查,檢查完后處死實驗動物，取髓核組織經(jīng)行HE染色、免疫組化及原位末端標(biāo)記檢查。 結(jié)果：（1）X線檢查：術(shù)后第4周至第12周，X線可見實驗組椎間隙高度進(jìn)行性下降，平均DHI%值隨時間延長而明顯減小，，與空白組、對照組相比術(shù)后4、8、12周三個時間點(diǎn)差異均有顯著性意義（P0.05），而對照組和空白組相比術(shù)后4、8、12周三個時間點(diǎn)差異無顯著性意義（P0.05）。（2）MRI檢查：術(shù)后第4周至第12周，MRI可見實驗組椎間隙T2加權(quán)像信號逐漸降低，按改良的Thompson分級標(biāo)準(zhǔn)分級隨時間延長逐漸偏向嚴(yán)重，與空白組、對照組相比術(shù)后4、8、12周三個時間點(diǎn)差異均有顯著性意義（P0.05）,而對照組和空白組相比術(shù)后4、8、12周三個時間點(diǎn)差異無顯著性意義（P0.05）。（3）HE染色：鏡下觀察：對照組及空白組在術(shù)前及術(shù)后各階段組織學(xué)無明顯改變，中央髓核組織可見大量的脊索細(xì)胞和少量的類軟骨細(xì)胞；而4、8周實驗組組髓核細(xì)胞逐漸減少，12周髓核組織內(nèi)可見大量纖維軟骨組織。（4）免疫組化染色及TUNEL顯示:I型膠原、Bax表達(dá)及細(xì)胞凋亡率：術(shù)后4、8、12周三個時間點(diǎn)實驗組和空白組、對照組差異有顯著性（P0.05），且實驗組的表達(dá)和細(xì)胞凋亡率隨時間增加，而術(shù)后4、8、12周三個時間點(diǎn)對照組和空白組無顯著差異（P0.05）；Ⅱ型膠原、Bcl-2：術(shù)后4、8、12周三個時間點(diǎn)實驗組和空白組、對照組差異有顯著性（P0.05），且實驗組的表達(dá)隨時間逐漸減少，而術(shù)后4、8、12周三個時間點(diǎn)對照組和空白組無顯著差異（P0.05）。 結(jié)論：1.TNF-α可介導(dǎo)髓核細(xì)胞的凋亡，且凋亡率隨時間延長而逐漸升高，即TNF-α可介導(dǎo)髓核的退變；微量注射器的穿刺作用對細(xì)胞凋亡無明顯影響。2.TNF-α介導(dǎo)的椎間盤術(shù)后椎間隙高度丟失，且丟失的高度隨時間延長而逐漸增加；且TNF-α介導(dǎo)的椎間盤T2加權(quán)信號隨時間延長逐漸降低。3.TNF-α介導(dǎo)的椎間盤髓核細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原表達(dá)逐漸增多，Ⅱ型膠原表達(dá)逐漸減少，從而椎間盤的抗壓能力下降。4.在TNF-α介導(dǎo)的髓核組織內(nèi)bcl-2陽性細(xì)胞百分比逐漸降低，而bax陽性細(xì)胞百分比逐漸升高，說明TNF-α誘導(dǎo)的椎間盤退變過程中，Bcl-2、Bax發(fā)揮著重要調(diào)控作用。5.成功建立了TNF-α作用下的IVDD動物模型。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R681.53;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1239381