本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌特異性抗原ESAT6的串聯(lián)表達(dá)及其免疫原性研究

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【摘要】：目的表達(dá)并純化ESAT6c2融合蛋白,并對融合蛋白免疫原性進(jìn)行鑒定,以用作結(jié)核菌特異性IFN-γElispot試劑盒的特異性抗原。方法全基因合成ESAT6目的基因,利用Bam HⅠ和BglⅡ同尾酶串聯(lián)目的基因,構(gòu)建ESAT6c2-p ET25b重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化E.coli,誘導(dǎo)表達(dá)。Ni柱親和純化融合蛋白,測定濃度后應(yīng)用到T.SPOT-TB試劑盒(Oxford)檢測臨床樣本進(jìn)行免疫原性研究。結(jié)果成功構(gòu)建了ESAT6串聯(lián)表達(dá)重組質(zhì)粒,制備出高純度的ESAT6c2融合蛋白。臨床樣本檢測結(jié)果表明ESAT6c2融合蛋白作為刺激源,與臨床診斷相比特異性為100%(20/20),靈敏度為84.61%(33/39);與T.SPOT-TB試劑盒TA檢測孔有較強(qiáng)一致性(Kappa=0.932)。穩(wěn)定性研究也表明,ESAT6c2融合蛋白經(jīng)加速破壞試驗(yàn)后,與臨床診斷相比特異性為100%(20/20),靈敏度為84.38%(27/32);依然與TA檢測孔有較強(qiáng)一致性(Kappa=0.923)。結(jié)論 獲得的高純度ESAT6c2融合蛋白,可以應(yīng)用于結(jié)核菌特異性IFN-γElispot試劑盒。
【作者單位】： 鄭州人福博賽生物有限責(zé)任公司;鄭州市第七人民醫(yī)院內(nèi)分泌科;鄭州市第六人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：鄭州產(chǎn)學(xué)研項(xiàng)目(0911SCXY00542)
【分類號】：R392
【正文快照】： 結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染所致的一種慢性傳染病,其中以肺結(jié)核最為常見,呈世界性分布。目前結(jié)核病仍舊是人類所面臨的最嚴(yán)重的傳染病之一,早診斷、早治療在結(jié)核病的防控中有著重要意義。近年來,基于結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的γ-干擾素釋放試驗(yàn)(interferon gamma release ass

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本文編號：1231009