本文關鍵詞：結核分枝桿菌特異性抗原ESAT6的串聯(lián)表達及其免疫原性研究

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【摘要】：目的表達并純化ESAT6c2融合蛋白,并對融合蛋白免疫原性進行鑒定,以用作結核菌特異性IFN-γElispot試劑盒的特異性抗原。方法全基因合成ESAT6目的基因,利用Bam HⅠ和BglⅡ同尾酶串聯(lián)目的基因,構建ESAT6c2-p ET25b重組質粒,轉化E.coli,誘導表達。Ni柱親和純化融合蛋白,測定濃度后應用到T.SPOT-TB試劑盒(Oxford)檢測臨床樣本進行免疫原性研究。結果成功構建了ESAT6串聯(lián)表達重組質粒,制備出高純度的ESAT6c2融合蛋白。臨床樣本檢測結果表明ESAT6c2融合蛋白作為刺激源,與臨床診斷相比特異性為100%(20/20),靈敏度為84.61%(33/39);與T.SPOT-TB試劑盒TA檢測孔有較強一致性(Kappa=0.932)。穩(wěn)定性研究也表明,ESAT6c2融合蛋白經加速破壞試驗后,與臨床診斷相比特異性為100%(20/20),靈敏度為84.38%(27/32);依然與TA檢測孔有較強一致性(Kappa=0.923)。結論 獲得的高純度ESAT6c2融合蛋白,可以應用于結核菌特異性IFN-γElispot試劑盒。
【作者單位】： 鄭州人福博賽生物有限責任公司;鄭州市第七人民醫(yī)院內分泌科;鄭州市第六人民醫(yī)院檢驗科;鄭州大學生命科學學院;
【基金】：鄭州產學研項目(0911SCXY00542)
【分類號】：R392
【正文快照】： 結核病是由結核分枝桿菌感染所致的一種慢性傳染病,其中以肺結核最為常見,呈世界性分布。目前結核病仍舊是人類所面臨的最嚴重的傳染病之一,早診斷、早治療在結核病的防控中有著重要意義。近年來,基于結核分枝桿菌特異性抗原的γ-干擾素釋放試驗(interferon gamma release ass

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本文編號：1231009