本文關(guān)鍵詞：諾如病毒GⅡ.4型Hunter504D株P(guān)粒子的表達(dá)，表征及免疫原性研究

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【摘要】：諾如病毒（norovirus,NoV）是最常見(jiàn)的引起病毒性胃腸炎的病原，已有報(bào)道，十一月至三月之間是北半球的暴發(fā)高峰期。在過(guò)去的十年，NoV在全球性范圍暴發(fā)的次數(shù)在不斷增加，尤其是由GII基因組4基因型（GII.4）變異株引起的暴發(fā)。在世界范圍內(nèi)，NoV可以感染所有年齡的人。疾病預(yù)防控制中心估計(jì)，美國(guó)平均每年食物性感染病例中至少有2300萬(wàn)例是因NoV感染引起的。而且在監(jiān)視歐洲食物性感染的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)表明，在1995-2000年之間暴發(fā)的病毒性胃腸炎可能是由這些病毒引起的。 病毒引起的疾病通常是自身限制的，癥狀包括急性的嘔吐和腹瀉，在一至三天之內(nèi)癥狀會(huì)緩解。對(duì)NoV進(jìn)行相關(guān)性研究的原因在于其在人群中有較高的患病率，尤其在老年人和免疫抑制患者中較為嚴(yán)重，延長(zhǎng)發(fā)病時(shí)間。NoV暴發(fā)可能影響數(shù)百人，眾所周知，NoV暴發(fā)很難被控制，并且主要發(fā)生在人們緊密接觸的地方，例如醫(yī)院，長(zhǎng)期看護(hù)中心。由于抗人類(lèi)NoV的疫苗尚在研究中，，減少NoV感染的預(yù)防措施包括洗手，攝入安全的水和食物，遠(yuǎn)離被污染的物質(zhì)以避免疾病傳播。 人類(lèi)NoV不能在細(xì)胞中有效的培養(yǎng)或感染小動(dòng)物，因此，亞單位疫苗對(duì)NoV來(lái)說(shuō)是一個(gè)選擇。NoV衣殼蛋白在昆蟲(chóng)細(xì)胞中通過(guò)重組桿狀病毒或其他的真核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)后自發(fā)的組裝成VLP，然而在原核表達(dá)系統(tǒng)中不能成功產(chǎn)生VLP。另一種類(lèi)型的NoV亞病毒顆粒P粒子有可能成為第二代NoV疫苗。P粒子由P結(jié)構(gòu)域形成并與VLP有相同的抗原表位。P粒子具有很高的免疫原性并且非常穩(wěn)定，最重要的是，P粒子可以在大腸桿菌中高效的表達(dá)。 GII.4型NoV及其變異株一直是全球的流行株，存在持續(xù)感染。近幾年來(lái)，GII.4型NoV一直是引起我國(guó)NoV暴發(fā)的主要流行株。本實(shí)驗(yàn)選擇2004-2006年間暴發(fā)流行的Hunter株P(guān)結(jié)構(gòu)域進(jìn)行研究，希望能獲得在原核表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)的P蛋白。通過(guò)對(duì)P蛋白的研究，為NoV亞單位疫苗研制提供理論基礎(chǔ)。 本研究中以合成GII.4型Hunter株ORF2序列為模板，進(jìn)行PCR反應(yīng)并擴(kuò)增出P結(jié)構(gòu)域，克隆到表達(dá)載體pET28a(+)，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒(pET28a-P Particle)，在大腸桿菌BL21中表達(dá)P蛋白。為了檢測(cè)重組蛋白的分子量大小，重組蛋白經(jīng)SDS-PAGE凝膠分離。分析表達(dá)產(chǎn)物顯示P結(jié)構(gòu)域編碼一個(gè)分子量大小約為35KD的蛋白。P蛋白經(jīng)Ni-NTA親和層析柱純化、分子篩分離、電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)P結(jié)構(gòu)域在大腸桿菌中表達(dá)后，形成不同的P粒子。我們之后研究P粒子在Balb/c小鼠和新西蘭大白兔體內(nèi)的免疫反應(yīng)，用P蛋白做抗原通過(guò)ELISA方法檢測(cè)血清中NoV的抗體，并且通過(guò)血清對(duì)P粒子與組織血型抗原（HBGA）之間作用的阻斷檢測(cè)血清中NoV抗體的中和活性。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R392.1

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王大鵬;吳清平;寇曉霞;;諾瓦克病毒研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)報(bào);2007年05期

2 李曉波;付瑞;王吉;衛(wèi)禮;王淑菁;岳秉飛;賀爭(zhēng)鳴;;鼠諾如病毒分離株全基因組序列的測(cè)定及分析[J];中國(guó)病毒病雜志;2013年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 薛亮;吳清平;;諾如病毒分子進(jìn)化研究進(jìn)展[A];2010第二屆中國(guó)食品安全高峰論壇論文集[C];2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 薛亮;諾如病毒GⅡ型流行株基因組特征分析及進(jìn)化機(jī)制研究[D];華南理工大學(xué);2013年

本文編號(hào)：1226508