本文關(guān)鍵詞：兔半月板纖維軟骨細(xì)胞的體外去分化研究

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【摘要】：目的:比較研究不同代次間兔半月板纖維軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的改變,為構(gòu)建組織工程半月板和細(xì)胞治療中的種子細(xì)胞優(yōu)選提供進(jìn)一步的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。方法:采用機(jī)械分離與酶連續(xù)消化相結(jié)合的方法體外分離兔半月板纖維軟骨細(xì)胞,單層培養(yǎng)傳代至第5代。采用相差倒置顯微鏡和SEM觀察各代細(xì)胞的形態(tài)變化和超微結(jié)構(gòu),MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況并描繪生長(zhǎng)曲線,采用細(xì)胞化學(xué)染色和免疫組化鑒定細(xì)胞分泌的蛋白聚糖和Ⅰ、Ⅱ型膠原蛋白。結(jié)果:半月板纖維軟骨細(xì)胞原代接種后8~12 h開(kāi)始貼壁,48~72h大部分細(xì)胞貼壁,胞質(zhì)逐漸展開(kāi),細(xì)胞變大伸長(zhǎng),形成突起,呈多角形,細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,輪廓清晰,鏡下觀察有立體感,7~10 d后,細(xì)胞長(zhǎng)滿傳代。傳代后細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力和增殖速度明顯加快,原代至第2代細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則,多呈多角形,大小均一。第3代后隨著傳代次數(shù)的增加,細(xì)胞中梭形細(xì)胞增多,分泌和增殖能力下降,傳代周期延長(zhǎng)。第5代分裂相少見(jiàn),密度稀疏,細(xì)胞形態(tài)不佳,約80%呈長(zhǎng)梭形,分泌和增殖能力下降。SEM示第1代半月板細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,呈多極性,表面有突起;第5代細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,多呈梭形。生長(zhǎng)曲線可見(jiàn)第4代前半月板細(xì)胞生長(zhǎng)速度及生長(zhǎng)周期均相似,第5代后細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢,增殖減緩。細(xì)胞化學(xué)和免疫組化染色分析膠原和蛋白聚糖的表達(dá):隨傳代的進(jìn)行,Ⅱ型膠原蛋白和蛋白聚糖的表達(dá)逐漸減弱而Ⅰ型膠原表達(dá)逐漸增強(qiáng)。結(jié)論:體外單層培養(yǎng)條件下,隨著傳代的進(jìn)行,細(xì)胞活力逐漸下降,生長(zhǎng)速度減慢,傳代周期延長(zhǎng),逐漸變?yōu)樗笮?形態(tài)不規(guī)則。體外單層培養(yǎng)系統(tǒng)中半月板纖維軟骨細(xì)胞表型隨傳代的進(jìn)行,Ⅱ型膠原蛋白和蛋白聚糖的表達(dá)逐漸減少而Ⅰ型膠原表達(dá)逐漸增多,體外單層培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的半月板纖維軟骨細(xì)胞從第3代開(kāi)始逐漸失去其特異性表型,發(fā)生去分化,逐漸變?yōu)槌衫w維細(xì)胞的表型。體外單層分離培養(yǎng)的第5代前半月板細(xì)胞基本維持纖維軟骨細(xì)胞的表型和生物學(xué)特性,可作為組織工程半月板的種子細(xì)胞。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院骨科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81301560) 中國(guó)博士后科學(xué)基金(2012M521698)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 種子細(xì)胞是組織工程半月板和細(xì)胞治療的首要因素,也是保證組織工程半月板進(jìn)一步深入研究和應(yīng)用的前提條件[1]。構(gòu)建組織工程半月板和細(xì)胞治療需要大量的種子細(xì)胞,目前用于組織工程半月板的種子細(xì)胞主要有半月板軟骨細(xì)胞、干細(xì)胞等[2];干細(xì)胞如骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有多項(xiàng)分化潛

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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5 柯一凡;動(dòng)態(tài)和靜態(tài)壓力作用對(duì)山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞凝膠組織基質(zhì)代謝的影響[D];蘭州大學(xué);2010年

6 齊夢(mèng)怡;α-平滑肌肌動(dòng)蛋白在山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤和自組裝基體中的表達(dá)[D];蘭州大學(xué);2012年

7 李光曦;關(guān)節(jié)鏡下成形縫合術(shù)治療完全型盤狀半月板損傷的臨床觀察[D];鄭州大學(xué);2013年

8 王s，

本文編號(hào)：1210485