本文關鍵詞：表達全人源抗人IgE單抗的候選細胞株鑒定及篩選

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【摘要】：目的:鑒定及篩選表達原創(chuàng)性全人源抗人Ig E單克隆抗體的候選工程細胞株。方法:對實驗室前期篩選到的Mab1#及Mab2#2個候選細胞株的3 L搖瓶流加培養(yǎng)12 d并經(jīng)Protein A一步柱層析純化的抗體樣品,進行紫外光譜全波長掃描,采用LC-MS測定精確相對分子質(zhì)量進行鑒別,采用SDS-PAGE(還原型及非還原型)進行分子完整性分析,采用SEC-HPLC進行集聚傾向性分析,采用IEF進行等電點(p I)測定及對N-糖苷酶(PNGase F)酶切前后樣品的電荷進行比較分析,采用CEX-HPLC進行電荷異質(zhì)性分析。同時,對Mab1#及Mab2#2個候選細胞株的3個月傳代穩(wěn)定性進行比較研究。結果:Mab1#及Mab2#2個候選細胞株表達抗體的紫外最大吸收波長均為280 nm;LC-MS輕鏈相對分子質(zhì)量分別為23 464.82和23 465.06,重鏈(G0F糖型)相對分子質(zhì)量分別為50 807.50 Da和50 807.48 Da,均與理論預期相符;SDS-PAGE(還原型及非還原型)電泳結果顯示表達的抗體分子完整性好;SEC-HPLC聚集傾向分析顯示2株單抗經(jīng)一步Protein A親和柱層析后的可溶性聚合體的含量均小于2%;IEF結果顯示Mab1#和Mab2#p I分別為8.38和8.44,PNGase F酶切前后未見明顯的由于糖基化修飾引起的電荷變異體。CEX-HPLC結果顯示2株單抗的電荷均一性好,酸性變體及堿性變體含量之和均小于4%。完成的3個月細胞株穩(wěn)定性研究結果顯示Mab1#及Mab2#2株克隆均穩(wěn)定。結論:Mab1#及Mab2#2個候選細胞株具有相似的目標抗體表達量、表達抗體的質(zhì)量(分子完整性、聚集傾向、電荷異質(zhì)性、親和力)、以及細胞穩(wěn)定性特征和細胞生長代謝特征等質(zhì)量屬性,均符合制定的階段篩選目標。
【作者單位】： 武漢生物制品研究所有限責任公司抗體研究室;中國生物技術股份有限公司科研與國際合作部;
【分類號】：R392
【正文快照】： 目前全球尚無全人源抗人Ig E單抗進入臨床階段的開發(fā)或上市[1-2]。本實驗室前期構建及篩選到2株表達原創(chuàng)性全人源抗人Ig E單抗的候選克隆Mab1#和Mab2#(另文發(fā)表),在40 m L搖瓶及3 L搖瓶流加培養(yǎng)中具有相似的細胞生長及代謝特征,目標抗體表達量接近0.5 g·L-1,親和力分別為8.94

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本文編號：1209592