本文關(guān)鍵詞：表達(dá)全人源抗人IgE單抗的候選細(xì)胞株鑒定及篩選

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【摘要】：目的:鑒定及篩選表達(dá)原創(chuàng)性全人源抗人Ig E單克隆抗體的候選工程細(xì)胞株。方法:對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期篩選到的Mab1#及Mab2#2個(gè)候選細(xì)胞株的3 L搖瓶流加培養(yǎng)12 d并經(jīng)Protein A一步柱層析純化的抗體樣品,進(jìn)行紫外光譜全波長(zhǎng)掃描,采用LC-MS測(cè)定精確相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行鑒別,采用SDS-PAGE(還原型及非還原型)進(jìn)行分子完整性分析,采用SEC-HPLC進(jìn)行集聚傾向性分析,采用IEF進(jìn)行等電點(diǎn)(p I)測(cè)定及對(duì)N-糖苷酶(PNGase F)酶切前后樣品的電荷進(jìn)行比較分析,采用CEX-HPLC進(jìn)行電荷異質(zhì)性分析。同時(shí),對(duì)Mab1#及Mab2#2個(gè)候選細(xì)胞株的3個(gè)月傳代穩(wěn)定性進(jìn)行比較研究。結(jié)果:Mab1#及Mab2#2個(gè)候選細(xì)胞株表達(dá)抗體的紫外最大吸收波長(zhǎng)均為280 nm;LC-MS輕鏈相對(duì)分子質(zhì)量分別為23 464.82和23 465.06,重鏈(G0F糖型)相對(duì)分子質(zhì)量分別為50 807.50 Da和50 807.48 Da,均與理論預(yù)期相符;SDS-PAGE(還原型及非還原型)電泳結(jié)果顯示表達(dá)的抗體分子完整性好;SEC-HPLC聚集傾向分析顯示2株單抗經(jīng)一步Protein A親和柱層析后的可溶性聚合體的含量均小于2%;IEF結(jié)果顯示Mab1#和Mab2#p I分別為8.38和8.44,PNGase F酶切前后未見(jiàn)明顯的由于糖基化修飾引起的電荷變異體。CEX-HPLC結(jié)果顯示2株單抗的電荷均一性好,酸性變體及堿性變體含量之和均小于4%。完成的3個(gè)月細(xì)胞株穩(wěn)定性研究結(jié)果顯示Mab1#及Mab2#2株克隆均穩(wěn)定。結(jié)論:Mab1#及Mab2#2個(gè)候選細(xì)胞株具有相似的目標(biāo)抗體表達(dá)量、表達(dá)抗體的質(zhì)量(分子完整性、聚集傾向、電荷異質(zhì)性、親和力)、以及細(xì)胞穩(wěn)定性特征和細(xì)胞生長(zhǎng)代謝特征等質(zhì)量屬性,均符合制定的階段篩選目標(biāo)。
【作者單位】： 武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司抗體研究室;中國(guó)生物技術(shù)股份有限公司科研與國(guó)際合作部;
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 目前全球尚無(wú)全人源抗人Ig E單抗進(jìn)入臨床階段的開(kāi)發(fā)或上市[1-2]。本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建及篩選到2株表達(dá)原創(chuàng)性全人源抗人Ig E單抗的候選克隆Mab1#和Mab2#(另文發(fā)表),在40 m L搖瓶及3 L搖瓶流加培養(yǎng)中具有相似的細(xì)胞生長(zhǎng)及代謝特征,目標(biāo)抗體表達(dá)量接近0.5 g·L-1,親和力分別為8.94

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本文編號(hào)：1209592