本文關(guān)鍵詞：人源抗TLR4抗體IgG的制備及其中和特性分析

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【摘要】：目的 :構(gòu)建全人源抗人Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗體輕、重鏈表達(dá)載體,在293Free style細(xì)胞中表達(dá)并純化,分析該重組全分子抗體的生物學(xué)活性。方法:設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增全人源抗人TLR4抗體可變區(qū)編碼序列,將其分別克隆到真核表達(dá)載體p FUSE-CHIg-h G1和p FUSE-CLIg-hl中,共轉(zhuǎn)染至293Free style細(xì)胞,表達(dá)產(chǎn)物用protein A親和層析柱純化。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blot、免疫共沉淀、質(zhì)譜分析及蛋白芯片檢測(cè)抗體的免疫學(xué)特性,并檢測(cè)該抗體對(duì)人單核細(xì)胞淋巴瘤THP1細(xì)胞腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表達(dá)的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建全人源抗人TLR4抗體真核表達(dá)載體,獲得的全分子抗TLR4抗體保持了與抗原的結(jié)合活性,對(duì)THP-1細(xì)胞TNF-α表達(dá)的抑制率可達(dá)85.7%。結(jié)論:重組全人源抗TLR4 Ig G保持了與TLR4的結(jié)合特異性,并具有明顯的中和作用,對(duì)炎癥治療具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)病理系衛(wèi)生部抗體技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國人民解放軍第八一醫(yī)院全軍肝病中心;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：國家新藥創(chuàng)制項(xiàng)目資助(2013ZX09J13110-05B) 全軍醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究計(jì)劃(08G023)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： [Acta Univ Med Nanjing,2015,35(06):777-781,786]Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)是Toll樣受體家族的成員之一,是脂多糖(lipopolysacc-haride,LPS)的模式識(shí)別受體[1-2]。TLR4廣泛表達(dá)在免疫細(xì)胞表面,其中既包括非特異免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞,又包

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本文編號(hào)：1205478