本文關(guān)鍵詞：二甲基苯蒽誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌模型研究

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【摘要】：乳腺癌是目前公認(rèn)的女性第二大殺手，乳腺癌動(dòng)物模型對(duì)于乳腺癌病因研究和治療、藥物篩選與評(píng)價(jià)均具有重要的意義。二甲基苯蒽（DMBA）誘導(dǎo)大鼠乳腺癌模型較為成熟，但在小鼠體內(nèi)能否成功建立乳腺癌模型研究較少。本文目的是探索DMBA能否在小鼠體內(nèi)成功誘導(dǎo)乳腺癌，為研究乳腺癌發(fā)病機(jī)制和評(píng)價(jià)中藥治療乳腺癌的特色優(yōu)勢(shì)提供良好的動(dòng)物模型。 本研究采用C57BL/6小鼠灌胃二甲基苯蒽（DMBA）橄欖油溶液50mg/kg，每周1次，連續(xù)5周的造模方式誘導(dǎo)小鼠乳腺癌模型。通過觀察實(shí)驗(yàn)期間小鼠乳腺腫瘤潛伏期、發(fā)生率、生存期、外觀、體溫、自主活動(dòng)、外耳微循環(huán)變化及血液流變學(xué)指標(biāo)，評(píng)價(jià)乳腺癌小鼠模型的中醫(yī)學(xué)體征變化；通過組織切片HE染色法、SABC免疫組化染色法，觀察小鼠乳腺癌組織不同時(shí)期形態(tài)學(xué)變化及TGF-β1含量表達(dá)，同時(shí)與臨床病理切片相比較，評(píng)價(jià)小鼠乳腺癌生物學(xué)特性與臨床乳腺癌的相似性；通過給予以附子為主藥的溫?zé)崽幏胶鸵云压橹魉幍暮疀鎏幏竭M(jìn)行藥物佐證，檢測(cè)能量代謝指標(biāo)（紅細(xì)胞膜Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶）活性、血清雌激素（雌二醇、孕酮）水平、血清細(xì)胞因子及其受體（NGF、TrkA、BDNF、TrkB、bFGF、TGF-β1、PAF）和細(xì)胞外基質(zhì)（TIMP-1、MMP-9、LN、COLⅠ、Ⅱ、Ⅲ）含量，評(píng)價(jià)寒熱兩種療法對(duì)乳腺癌小鼠的影響。采用MTT法、軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)、BrdU摻入細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)、健那綠染色實(shí)驗(yàn)、明膠酶譜法、Western-blot方法，觀察DMBA對(duì)7701正常肝細(xì)胞分裂增殖能力、線粒體變化、MMPs和TGF-β1表達(dá)的影響，驗(yàn)證DMBA誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化的機(jī)制。 結(jié)果表明，造模后小鼠隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸出現(xiàn)畏寒喜暖、蜷縮少動(dòng)、體溫下降、外耳微循環(huán)受阻、全血粘度及紅細(xì)胞聚集指數(shù)增高、紅細(xì)胞ATP酶活性降低、血中雌二醇和孕酮水平升高等狀況，給予藥物干預(yù)后以附子為主藥的溫?zé)崽幏讲粌H可以明顯改善上述狀況，而且可以降低血清中細(xì)胞因子及其受體水平、細(xì)胞外基質(zhì)水平，延長(zhǎng)小鼠存活期，阻止腫瘤生長(zhǎng)。兩次造模小鼠乳腺腫瘤潛伏期、發(fā)生率、生存曲線相似。 組織切片HE染色顯示，DMBA誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌發(fā)生是通過正�！錾堑湫驮錾┳儭䴘�(rùn)性癌變逐漸演變的動(dòng)態(tài)過程,與人體乳腺癌發(fā)展過程相似。免疫組化染色顯示，DMBA誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌胞漿中TGF-β1表達(dá)與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)，與臨床人體乳腺癌結(jié)果一致。 體外結(jié)果顯示：DMBA對(duì)7701正常肝細(xì)胞表現(xiàn)出劑量依賴性抑制作用，IC50為42.5μg/mL，，在50-100μg/mL濃度范圍內(nèi)可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化。與正常肝細(xì)胞相比，經(jīng)DMBA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞軟瓊脂克隆形成能力明顯提高，BrdU摻入細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，細(xì)胞內(nèi)線粒體異常、增多。DMBA處理后的肝細(xì)胞和正常肝細(xì)胞電泳圖譜存在明顯差異，前者與LLC、4T1細(xì)胞蛋白表達(dá)相似。明膠酶圖譜顯示經(jīng)DMBA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞MMP-9和MMP-2活性增加。Western-blot結(jié)果顯示，經(jīng)DMBA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞TGF-β1表達(dá)量明顯高于正常肝細(xì)胞。 以上結(jié)果表明，C57BL/6小鼠灌胃DMBA50mg/kg，每周1次，連續(xù)5周的造模方式能成功建立小鼠乳腺癌模型，該模型與臨床人乳腺癌相似，可以用于乳腺癌病因和中藥治療乳腺癌的優(yōu)勢(shì)研究。
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 孫鵬濤;沈建紅;沈嬙;楊樂平;張建興;;乳腺癌中醫(yī)證候與腫瘤微血管生成特點(diǎn)的關(guān)系[J];新中醫(yī);2010年02期

2 國(guó)愛英;石磊垣;王兆祥;常克力;鄒永勝;林庭樽;;乳腺癌血清中雌激素水平[J];腫瘤臨床;1984年03期

本文編號(hào)：1194193