本文關鍵詞：糖類抗原50時間分辨熒光免疫試劑實驗分析性能及臨床性能評價研究

  更多相關文章： 糖類抗原50 時間分辨熒光免疫 腫瘤標記物

【摘要】：[研究背景及目的] 糖類抗原50(Carcinoma Antigen50, CA50)是一個主要用于消化道惡性腫瘤檢測的腫瘤標記物。CA50在診斷惡性腫瘤時表現(xiàn)出較強的敏感性,所以在臨床中廣泛用于多種惡性腫瘤的篩查、輔助診斷、療效評價、預后及復發(fā)判定,尤其是在消化道腫瘤中應用價值較大。但CA50特異性相對欠缺,對某一特定腫瘤的針對性不強,限制了CA50的臨床應用,這也是大部分腫瘤標記物的通病,除了AFP、PSA等少數(shù)腫瘤標物,大部分腫瘤標記物的特異性都不太好。為了彌補CA50特異性低的缺陷,可以通過與其它腫瘤標記物聯(lián)合檢測、調整參考值等手段適當提高其特異性。總體來說,CA50的臨床應用價值還是比較大。 時間分辨熒光免疫分析(Timed-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)是一種在臨床上廣泛應用的定量免疫檢測技術。該技術采用具有獨特熒光特性的鑭系元素及其螯合物為示蹤物。銪、鋱等鑭系元素發(fā)射的熒光具有以下特點：離子螯合物熒光衰變時間長；stokes位移大；發(fā)射光光譜狹窄。相對于酶聯(lián)免疫、放射免疫,該技術具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、重復性好、無放射污染、標準曲線范圍寬、應用范圍廣等優(yōu)點；相對于國外進口化學發(fā)光免疫分析試劑又有價格便宜、通量高等優(yōu)點。開發(fā)CA50時間分辨免疫檢測試劑可以起到提高臨床檢測水平、進口替代及豐富檢測儀器產品群的作用。 本研究旨在對團隊開發(fā)出的CA50時間分辨免疫檢測試劑進行實驗室分析性能評價和臨床性能評價,為申報臨床體外診斷試劑注冊提供依據(jù)。 [方法] (一)CA50時間分辨免疫檢測試劑分析性能評價。分別對待考核CA50檢測試劑的最低檢出量、線性范圍、HOOK效應、準確性、精密度、特異性、抗干擾能力、穩(wěn)定性、參考范圍等分析性能指標進行評價。 (二)CA50時間分辨免疫檢測試劑分析性能評價。將在三家三級甲等醫(yī)院用待考核試劑和參考試劑對臨床標本進行盲法對照檢測的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,對定性結果進行四格表卡方分析,計算敏感性、特異性、總符合率、kappa值等指標,評價符合隋況。對差異樣本用待考核試劑和復核試劑進行復檢,并進一步分析符合情況。對待考核試劑與參考試劑的檢測結果進行定量分析,繪制散點圖,分析相關系數(shù)、回歸方程等指標以評價兩者的相關性。繪制受試者工作特征曲線,計算曲線下面積,分析診斷率高低。 [結果] (一)CA50時間分辨免疫檢測試劑分析性能評價結果。 待考核CA50試劑的最低檢出量為0.37U/ml,準確性評價回收率為99.8%；線性范圍為0-300U/ml,樣品濃度超過1000U/ml開始出現(xiàn)HOOK效應,劑量反應曲線線性相關系數(shù)r為0.997；精密度評價中分析內、分析間精密度CV值均小于10%；特異性評價中待考核CA50試劑與AFP、CEA、CA153、CA125的交叉反應率小于0.1%,與CA199的交叉反應率為8.17%,表明CA199對檢測結果有影響；抗干擾能力評價中分別加入高濃度的甘油三酯、膽紅素、血紅蛋白的標本檢測回收率均在90-110%之間。 試劑盒儲存于4℃冰箱中保存14個月之內,最低檢出量檢測值在0.16-0.41U/mL之間,國際標準品的回收率(準確度)在90.8-100.1%之間,線性相關系數(shù)(r)在0.9903-0.9998之間,精密性檢測CV值在0.4-5.2%之間,各項指標均符合要求。當保存時間超過16個月時,準確度、精密度指標開始出現(xiàn)異常。 在37-C進行熱破壞實驗,3天和7天后的檢測結果顯示,最低檢出量檢測值在0.21-0.35U/mL之間,國際標準品的回收率(準確度)在94.6-102.4%之間,線性相關系數(shù)(r)在0.9930-0.9987之間；精密性檢測分析內CV值在0.1-5.6%,分析間CV值在1.3-11%之間,各項指標均符合要求。 在參考值確定時,對479例健康人的血清標本進行檢測,計算出95%可信區(qū)間為0-15.1U/ml,然后,從臨床應用的角度,比較了95%可信區(qū)間參考值與大多數(shù)市面試劑所用參考值(0-25U/m1),確定最終的參考值為0-25U/ml。 (二)CA50時間分辨免疫檢測試劑臨床性能評價結果。 本次研究采用盲法對照實驗,對納入臨床試驗標準的1048例標本進行平行檢測和統(tǒng)計分析,與參考方法(放免法)相比,本試劑盒的靈敏度為95.3%,特異度為97.4%,kappa值為0.924,總符合率為96.76%。對34例差異標本進行復核,有23例與復核試劑的檢測結果一致,11例結果不一致�？傮w來說兩種方法定性分析的符合率較高。從定量分析結果顯示,與參考試劑的相關系數(shù)為0.804(P0.01),相關性較好。受試者工作特征曲線分析曲線下面積(ROC-AUC)為0.996(0.994-0.998,95%CI),P0.001,診斷價值較高。表明試劑盒準確可靠,具有較高的臨床應用價值。 [結論] 上述結果表明本團隊研制的CA50時間分辨免疫檢測試劑的各項實驗分析性能指標(準確性、靈敏度、精密性、劑量反應曲線的線性、特異性、抗干擾能力、穩(wěn)定性等)均符合臨床檢測試劑要求,臨床分析性能與已上市產品相仿,具有較高的臨床應用價值�？梢蕴娲鄳姆派涿庖咴噭嘎�(lián)免疫試劑,綜合考慮性價比,還可以與市面上價格較高的進口化學發(fā)光試劑競爭。另外,CA199對CA50時間分辨免疫檢測試劑檢測結果有輕微干擾,建議CA50與CA199一同檢測。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Combined detection of serum tumor markers for differential diagnosis of solid lesions located at the pancreatic head[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2007年06期

，

本文編號：1182769