本文關(guān)鍵詞：糖類抗原50時(shí)間分辨熒光免疫試劑實(shí)驗(yàn)分析性能及臨床性能評(píng)價(jià)研究

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【摘要】：[研究背景及目的] 糖類抗原50(Carcinoma Antigen50, CA50)是一個(gè)主要用于消化道惡性腫瘤檢測(cè)的腫瘤標(biāo)記物。CA50在診斷惡性腫瘤時(shí)表現(xiàn)出較強(qiáng)的敏感性,所以在臨床中廣泛用于多種惡性腫瘤的篩查、輔助診斷、療效評(píng)價(jià)、預(yù)后及復(fù)發(fā)判定,尤其是在消化道腫瘤中應(yīng)用價(jià)值較大。但CA50特異性相對(duì)欠缺,對(duì)某一特定腫瘤的針對(duì)性不強(qiáng),限制了CA50的臨床應(yīng)用,這也是大部分腫瘤標(biāo)記物的通病,除了AFP、PSA等少數(shù)腫瘤標(biāo)物,大部分腫瘤標(biāo)記物的特異性都不太好。為了彌補(bǔ)CA50特異性低的缺陷,可以通過與其它腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合檢測(cè)、調(diào)整參考值等手段適當(dāng)提高其特異性�？傮w來說,CA50的臨床應(yīng)用價(jià)值還是比較大。 時(shí)間分辨熒光免疫分析(Timed-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)是一種在臨床上廣泛應(yīng)用的定量免疫檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)采用具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘蔫|系元素及其螯合物為示蹤物。銪、鋱等鑭系元素發(fā)射的熒光具有以下特點(diǎn)：離子螯合物熒光衰變時(shí)間長；stokes位移大；發(fā)射光光譜狹窄。相對(duì)于酶聯(lián)免疫、放射免疫,該技術(shù)具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好、無放射污染、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)；相對(duì)于國外進(jìn)口化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑又有價(jià)格便宜、通量高等優(yōu)點(diǎn)。開發(fā)CA50時(shí)間分辨免疫檢測(cè)試劑可以起到提高臨床檢測(cè)水平、進(jìn)口替代及豐富檢測(cè)儀器產(chǎn)品群的作用。 本研究旨在對(duì)團(tuán)隊(duì)開發(fā)出的CA50時(shí)間分辨免疫檢測(cè)試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室分析性能評(píng)價(jià)和臨床性能評(píng)價(jià),為申報(bào)臨床體外診斷試劑注冊(cè)提供依據(jù)。 [方法] (一)CA50時(shí)間分辨免疫檢測(cè)試劑分析性能評(píng)價(jià)。分別對(duì)待考核CA50檢測(cè)試劑的最低檢出量、線性范圍、HOOK效應(yīng)、準(zhǔn)確性、精密度、特異性、抗干擾能力、穩(wěn)定性、參考范圍等分析性能指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 (二)CA50時(shí)間分辨免疫檢測(cè)試劑分析性能評(píng)價(jià)。將在三家三級(jí)甲等醫(yī)院用待考核試劑和參考試劑對(duì)臨床標(biāo)本進(jìn)行盲法對(duì)照檢測(cè)的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方分析,計(jì)算敏感性、特異性、總符合率、kappa值等指標(biāo),評(píng)價(jià)符合隋況。對(duì)差異樣本用待考核試劑和復(fù)核試劑進(jìn)行復(fù)檢,并進(jìn)一步分析符合情況。對(duì)待考核試劑與參考試劑的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定量分析,繪制散點(diǎn)圖,分析相關(guān)系數(shù)、回歸方程等指標(biāo)以評(píng)價(jià)兩者的相關(guān)性。繪制受試者工作特征曲線,計(jì)算曲線下面積,分析診斷率高低。 [結(jié)果] (一)CA50時(shí)間分辨免疫檢測(cè)試劑分析性能評(píng)價(jià)結(jié)果。 待考核CA50試劑的最低檢出量為0.37U/ml,準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)回收率為99.8%；線性范圍為0-300U/ml,樣品濃度超過1000U/ml開始出現(xiàn)HOOK效應(yīng),劑量反應(yīng)曲線線性相關(guān)系數(shù)r為0.997；精密度評(píng)價(jià)中分析內(nèi)、分析間精密度CV值均小于10%；特異性評(píng)價(jià)中待考核CA50試劑與AFP、CEA、CA153、CA125的交叉反應(yīng)率小于0.1%,與CA199的交叉反應(yīng)率為8.17%,表明CA199對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響；抗干擾能力評(píng)價(jià)中分別加入高濃度的甘油三酯、膽紅素、血紅蛋白的標(biāo)本檢測(cè)回收率均在90-110%之間。 試劑盒儲(chǔ)存于4℃冰箱中保存14個(gè)月之內(nèi),最低檢出量檢測(cè)值在0.16-0.41U/mL之間,國際標(biāo)準(zhǔn)品的回收率(準(zhǔn)確度)在90.8-100.1%之間,線性相關(guān)系數(shù)(r)在0.9903-0.9998之間,精密性檢測(cè)CV值在0.4-5.2%之間,各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。當(dāng)保存時(shí)間超過16個(gè)月時(shí),準(zhǔn)確度、精密度指標(biāo)開始出現(xiàn)異常。 在37-C進(jìn)行熱破壞實(shí)驗(yàn),3天和7天后的檢測(cè)結(jié)果顯示,最低檢出量檢測(cè)值在0.21-0.35U/mL之間,國際標(biāo)準(zhǔn)品的回收率(準(zhǔn)確度)在94.6-102.4%之間,線性相關(guān)系數(shù)(r)在0.9930-0.9987之間；精密性檢測(cè)分析內(nèi)CV值在0.1-5.6%,分析間CV值在1.3-11%之間,各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。 在參考值確定時(shí),對(duì)479例健康人的血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),計(jì)算出95%可信區(qū)間為0-15.1U/ml,然后,從臨床應(yīng)用的角度,比較了95%可信區(qū)間參考值與大多數(shù)市面試劑所用參考值(0-25U/m1),確定最終的參考值為0-25U/ml。 (二)CA50時(shí)間分辨免疫檢測(cè)試劑臨床性能評(píng)價(jià)結(jié)果。 本次研究采用盲法對(duì)照實(shí)驗(yàn),對(duì)納入臨床試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的1048例標(biāo)本進(jìn)行平行檢測(cè)和統(tǒng)計(jì)分析,與參考方法(放免法)相比,本試劑盒的靈敏度為95.3%,特異度為97.4%,kappa值為0.924,總符合率為96.76%。對(duì)34例差異標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核,有23例與復(fù)核試劑的檢測(cè)結(jié)果一致,11例結(jié)果不一致�？傮w來說兩種方法定性分析的符合率較高。從定量分析結(jié)果顯示,與參考試劑的相關(guān)系數(shù)為0.804(P0.01),相關(guān)性較好。受試者工作特征曲線分析曲線下面積(ROC-AUC)為0.996(0.994-0.998,95%CI),P0.001,診斷價(jià)值較高。表明試劑盒準(zhǔn)確可靠,具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。 [結(jié)論] 上述結(jié)果表明本團(tuán)隊(duì)研制的CA50時(shí)間分辨免疫檢測(cè)試劑的各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)分析性能指標(biāo)(準(zhǔn)確性、靈敏度、精密性、劑量反應(yīng)曲線的線性、特異性、抗干擾能力、穩(wěn)定性等)均符合臨床檢測(cè)試劑要求,臨床分析性能與已上市產(chǎn)品相仿,具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值�？梢蕴娲鄳�(yīng)的放射免疫試劑／酶聯(lián)免疫試劑,綜合考慮性價(jià)比,還可以與市面上價(jià)格較高的進(jìn)口化學(xué)發(fā)光試劑競(jìng)爭(zhēng)。另外,CA199對(duì)CA50時(shí)間分辨免疫檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果有輕微干擾,建議CA50與CA199一同檢測(cè)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Combined detection of serum tumor markers for differential diagnosis of solid lesions located at the pancreatic head[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2007年06期

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本文編號(hào)：1182769