本文關(guān)鍵詞：外界環(huán)境因素對(duì)細(xì)菌整合子捕獲耐藥性基因盒調(diào)控機(jī)制的研究

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【摘要】：目的： 通過測定不同培養(yǎng)時(shí)間及不同培養(yǎng)溫度下，大腸桿菌BL21(DE3)宿主中整合子的整合頻率，研究環(huán)境因素對(duì)整合子捕獲耐藥性基因盒頻率的影響，探討整合子介導(dǎo)和傳播細(xì)菌耐藥性的調(diào)控機(jī)制，為臨床合理有效使用抗生素，減少耐藥菌株的產(chǎn)生和播散提供借鑒。 方法： 1.用pUC19為載體構(gòu)建高表達(dá)整合酶的重組質(zhì)粒pUCINT,隨后在pACYC184載體的不同位置分別插入整合子以及氨基糖苷腺苷轉(zhuǎn)移酶（aadA2）基因盒，該重組質(zhì)粒命名為pACINAD,將這2種相容的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，將10株此菌株培養(yǎng)12h和24h后用實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)測定發(fā)生整合作用的整合子的拷貝數(shù)和總的整合子的拷貝數(shù)，整合頻率為前者與后者的比值。 2.將20株此菌株隨機(jī)分成2組，，每組各10株，分別在41℃和37℃培養(yǎng)24h后測定大腸桿菌BL21(DE3)宿主中整合子的整合效率。 結(jié)果： 1.大腸桿菌BL21(DE3)宿主中整合子在12h時(shí)點(diǎn)整合效率的均值為5.51×10-5，在24h時(shí)點(diǎn)整合效率的均值為1.82×10-4。比較10株此菌株兩個(gè)時(shí)點(diǎn)的整合效率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.165，P0.01)。 2.在41℃大腸桿菌BL21(DE3)宿主中所測得的重組效率為1.81×10-3，在37℃的重組效率為1.75×10-4。比較兩者的重組效率，41℃組明顯高于37℃組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.266，P0.01)。 結(jié)論： 1.饑餓應(yīng)激對(duì)整合子捕獲耐藥性基因盒頻率有明顯的提高作用. 2.高溫可顯著提高整合子對(duì)aadA2耐藥性基因盒的整合效率。 3.表明不同的外界環(huán)境因素可影響整合子捕獲基因盒的效率，研究環(huán)境因素對(duì)整合子捕獲耐藥性基因盒效率的影響，對(duì)于指導(dǎo)臨床合理用藥，以及可能開發(fā)出有效的藥物或者采取一定措施來阻斷這一過程以延緩耐藥性基因的水平傳播和多重耐藥菌株的出現(xiàn)奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R3416;R378

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本文編號(hào)：1182003