本文關(guān)鍵詞：三種不同方法轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞效果比較

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【摘要】：目的探討通過腺病毒,慢病毒,脂質(zhì)體2000三種方法轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞的最佳方法。方法采用腺病毒,慢病毒,脂質(zhì)體2000三種方法分別轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞,并用熒光顯微鏡觀察細胞轉(zhuǎn)染熒光表達情況,流式細胞儀檢測THP-1細胞轉(zhuǎn)染效率,臺盼藍染色檢測細胞病死率。結(jié)果腺病毒對THP-1巨噬細胞轉(zhuǎn)染效率可在對細胞損傷較小的情況下達較高水平,但可能對細胞免疫狀態(tài)影響大。MOI=200時,轉(zhuǎn)染效率較低,僅為(29.81±2.50)%,細胞病死率為(5.17±0.44)%;MOI=800,轉(zhuǎn)染效率最高,EGFP陽性率可達(86.49±6.11)%,細胞病死率為(8.80±0.54)%;MOI升至1200后,EGFP陽性率為(77.88±5.77)%,細胞病死率上升明顯(14.50±0.77)%(P0.05);慢病毒轉(zhuǎn)染效率高及細胞毒性較腺病毒低,但因其病毒產(chǎn)量低,實驗消耗病毒量大,因而影響其應(yīng)用。當MOI=10時,EGFP陽性率僅為(28.09±1.67)%,細胞病死率為(4.74±0.31)%;MOI=60時,轉(zhuǎn)染率最高,EGFP陽性率為(91.96±1.66)%,細胞病死率升至(7.25±0.50)%,此時病死率才有統(tǒng)計學意義(P0.05)。脂質(zhì)體2000對THP-1巨噬細胞毒性較大,細胞死亡率高,轉(zhuǎn)染效率極低,不適合轉(zhuǎn)染。結(jié)論腺病毒與慢病毒轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞各存在一定優(yōu)劣,在實驗中需酌情選擇,脂質(zhì)體2000不適宜轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞。
【作者單位】： 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學南京臨床學院;南京軍區(qū)南京總醫(yī)院呼吸與危重癥學科;南京大學醫(yī)學院臨床學院;
【基金】：國家自然科學基金(81270064)
【分類號】：R392
【正文快照】： THP-1懸浮細胞為人白血病單核細胞系,屬于血液系統(tǒng)腫瘤細胞范疇,佛波酯(PMA)能夠誘導(dǎo)THP-1貼壁,并在48 h左右分化成熟,生成THP-1巨噬細胞[1-3]。THP-1巨噬細胞為終末細胞,喪失增殖分化能力,在光鏡下可見其緊密貼壁,呈現(xiàn)梭形或者多形性,并有偽足形成,電鏡下則可見胞漿內(nèi)線粒體

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本文編號：1179860